MDBK細胞（NBL-1牛腎細胞）

MDBK細胞係由S.H.Madin和N.B.Darby於(yu) 1957年2月18日從(cong) 一頭明顯正常的成年公牛的腎髒中提取。

MDBK牛腎細胞於(yu) 1967年7月以冷凍安瓿（F-145）的形式從(cong) ATCC第96代獲得，並以冷凍安瓿（F-145）的形式儲(chu) 存在ATCC。1973年，發現這批細胞受到牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）的汙染，導致其在某些用途上受到限製。為(wei) 解決(jue) 這個(ge) 問題，1982年8月，RA Van Deusen向ATCC提交一株經過篩選生產(chan) 且未感染BVDV的MDBK細胞，該批次為(wei) 第110代，另外成為(wei) 生產(chan) CCL-22細胞係的基礎。

MDBK (NBL-1)細胞係的染色體(ti) 為(wei) 亞(ya) 二倍體(ti) （2n=60），亞(ya) 二倍體(ti) 細胞中期通常有11-14條標記染色體(ti) ，其中包括4-5條著絲(si) 粒、3-4條亞(ya) 中著絲(si) 粒和4-5個(ge) 頂端著絲(si) 粒。未見HSR染色體(ti) 和DM染色體(ti) 。

MDBK細胞特性特征

• MDBK細胞對多種病毒表現出易感性，包括：水皰性口炎病毒、牛傳(chuan) 染性鼻氣管炎病毒、牛細小病毒、牛腺病毒2和3、牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）、副流感3型病毒

• 基因表達：MDBK細胞表達角蛋白。

• 病毒學研究：MDBK細胞適合作為(wei) 轉染宿主，用於(yu) 攜帶口蹄疫病毒（FMDV）前導蛋白基因逆轉錄病毒載體(ti) 的構建及其在牛腎細胞中的表達研究。

• 藥物篩選與(yu) 基因工程：MDBK細胞用於(yu) 新藥研發、毒性測試及基因整合和表達研究

MDBK牛腎細胞參數表

MDBK細胞（NBL-1牛腎細胞）培養教程

MDBK細胞傳代步驟

• 在進行傳(chuan) 代前，需在生物安全櫃中確保無菌操作，準備好PBS（磷酸鹽緩衝(chong) 液）和0.25%胰酶-0.53mM EDTA。
  

• 吸除MDBK細胞的舊培養(yang) 基，加入3-5 mL PBS輕輕洗滌，以去除殘留血清和代謝產(chan) 物。
  

• 吸幹PBS後，加入1 mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，均勻覆蓋MDBK細胞表麵，置於(yu) 37°C培養(yang) 箱中消化，時間約為(wei) 20秒到10分鍾，直至細胞間隙增大。
  

• 加入6-8 mL含10% FBS的完全培養(yang) 基終止胰酶消化，並輕輕吹打混勻MDBK細胞懸液。
  

• 在1000 rpm（約150 g）下離心3分鍾，棄去上清液。用新鮮完全培養(yang) 基重懸MDBK細胞，調整至合適濃度。
  

• 將重懸的MDBK細胞按1:3至1:4的比例接種到新的培養(yang) 瓶中，根據細胞密度和生長情況調整傳(chuan) 代比例。
  

MDBK細胞凍存步驟

• 使用92%完全培養(yang) 基和8% DMSO作為(wei) 凍存液，以減少冰晶對MDBK細胞的損傷(shang) 。
  

• 將MDBK細胞凍存管置於(yu) 4°C冰箱中預冷10分鍾，然後轉移至-20°C冷凍2小時，接著放入-80°C過夜。最後，長期儲(chu) 存於(yu) 液氮罐中。
  

MDBK細胞複蘇步驟

• 從(cong) 液氮中取出凍存的MDBK細胞，立即放入37°C水浴中快速解凍，時間控製在1-2分鍾，以避免DMSO的毒性作用。
  

• 解凍後，迅速加入5 mL預溫的完全培養(yang) 基稀釋DMSO。輕輕混勻後，將細胞轉移至離心管中，在1000 rpm下離心3分鍾，棄去上清液。
  

• 用新鮮的完全培養(yang) 基重懸MDBK細胞，並接種到培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37°C、5% CO₂培養(yang) 箱中孵育，觀察細胞貼壁情況和生長狀態。
  

注意事項

• 無菌操作：在操作MDBK細胞過程中，確保在無菌條件下進行，使用生物安全櫃以防止細胞汙染。

• 定期監測：應定期觀察MDBK細胞的形態和生長狀態，及時調整培養(yang) 基的pH和氣體(ti) 濃度。

• 複蘇後檢測：複蘇後的MDBK細胞應盡快進行活力檢測，確保其狀態和功能的穩定性。

• 傳(chuan) 代頻率：建議每2-3天傳(chuan) 代一次，避免MDBK細胞過度融合影響實驗效果。