PK-15細胞（豬腎細胞係）

PK-15細胞係是由Stice於(yu) 1955年從(cong) 精子豬的腎上皮細胞中分離建立，是PK-1a細胞的克隆係，具有遷移能力和穩定性。PK-15細胞在病毒學研究中應用廣泛。PK-15常見細胞來自多種細胞庫中，但部分來源的細胞係中存在人豬乳頭狀瘤病毒感染，PK-15細胞已成為(wei) 病毒分離、鑒定、疫苗開發及C型逆病毒研究中的重要工具。

PK-15細胞特性特征

• PK-15細胞對多種病毒具有易感性

• 豬病毒：豬瘟病毒、非洲豬瘟病毒、水皰性口炎病毒（如格拉斯哥和奧賽株）、痘苗病毒

• 人類病毒：人腺病毒4型和5型、人柯薩奇病毒B2；人柯薩奇病毒B3；人柯薩奇病毒B4；人柯薩奇病毒B5；人柯薩奇病毒B6

• 基因表達：表達纖溶酶原激活物，這與(yu) 細胞的增殖和遷移能力相關(guan) ；表達角蛋白，表明其上皮細胞特性。

• PK-15細胞對豬圓環病毒（PCV）抗原呈陽性；通過免疫過氧化物酶染色，細胞角蛋白呈陽性。

• 內(nei) 源性病毒：PK-15細胞含有內(nei) 源性C型逆轉錄病毒。

• 病毒增殖與(yu) 特性研究：PK-15細胞係能夠支持多種病毒的增殖。
  

• C型病毒研究：電鏡觀察顯示PK-15細胞內(nei) 存在C型病毒顆粒，是研究C型病毒的重要材料。

• 培養(yang) 基消耗快：PK-15細胞在培養(yang) 過程中對培養(yang) 基的消耗較快，需要定期更換培養(yang) 基以維持健康狀態。
  

• 粒產(chan) 生：在培養(yang) 過程中，PK-15細胞內(nei) 及周圍可能會(hui) 產(chan) 生較多顆粒，這屬於(yu) 正常現象。

PK-15細胞參數表

PK-15豬腎細胞係培養教程

PK-15細胞複蘇

• 使用DMEM培養(yang) 基（含10%胎牛血清FBS和1%青黴素-鏈黴素P/S），並在37℃預熱30分鍾，適合PK-15細胞的增殖需求。
  

• 預先37℃水浴鍋，用於(yu) 快速解凍PK-15細胞。

• 從(cong) 液氮中取出PK-15細胞凍存管，立即放入37℃水浴中，輕輕搖晃，溶液充分沐浴（約1-2分鍾）。
  

• 迅速取出凍存管，防止PK-15細胞因時間過長而死亡。

• 將解凍後的PK-15細胞懸液轉移至離心管，加入4 mL預熱的完全培養(yang) 基，混勻後在1000 RPM下離心4分鍾，取出DMSO。
  

• 棄去上清液，以降低對PK-15細胞的毒性。

• 使用1-2 mL完全脊髓吹打重懸PK-15細胞。
  

• 將細胞懸液移至T25培養(yang) 瓶中，補充6-8mL細胞完全。

• 將PK-15細胞放入37℃、5% CO2培養(yang) 箱中靜置過夜，次日更換細胞，觀察細胞狀態是否正常。
  

PK-15細胞傳代

• 當PK-15細胞的密度達到80%-90%時，就可以進行傳(chuan) 代。
  

• 棄去培養(yang) 上清，用透明、鎂離子的PBS潤洗PK-15細胞1-2次。
  

• 1 mL 0.25%胰酶-EDTA，輕輕晃動以覆蓋整個(ge) PK-15細胞層加入。

• 在37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，觀察PK-15細胞是否大部分變圓並捕獲。

• 觀察到大部分PK-15細胞脫落後，迅速添加2-3 mL細胞以終止胰酶消化。
  

• 在1000 RPM下離心4分鍾，棄去上清後，使用新鮮培養(yang) 基完全重懸PK-15細胞。
  

• 按1:3至1:5的比例將細胞均勻分配至新的培養(yang) 瓶中。

• 加入8 mL完全培養(yang) 基，繼續在37℃、5% CO2環境中培養(yang) PK-15細胞。
  

PK-15細胞凍存

• 使用90%完全培養(yang) 基和10% DMSO凍存液，適合PK-15細胞的凍存需求。
  

• 當PK-15細胞生長良好（80%-90%融合）時，按傳(chuan) 代步驟收集並重懸於(yu) 凍存液中。
  

• 將1 mL的PK-15細胞懸液分裝至凍存管。
  

• 先放入-80℃冰箱中預凍24小時，然後轉移至液氮罐進行長期保存，以維持PK-15細胞的存活率。

注意事項

• 無菌操作：培養(yang) PK-15細胞時，應嚴(yan) 格無菌操作，避免汙染。

• 細胞更換：每2-3天更換細胞，確保PK-15細胞生長環境穩定。

• 記錄細胞狀態：詳細記錄PK-15細胞的狀態、傳(chuan) 代次數及培養(yang) 條件，保證實驗的可追溯性和一致性。