ST細胞（豬睾丸細胞係）

ST細胞係（豬睾丸細胞係）是一種從(cong) 豬的睾丸組織中分離出的成纖維樣細胞，由McClurkin等人於(yu) 1960年建立。ST細胞係源自80-90日的豬齡，經過多次傳(chuan) 代培育後成功穩定為(wei) 常用的細胞係。ST細胞為(wei) 實驗室貼壁生長，具有上皮樣特性，廣泛篩選豬病毒的增殖和分離，尤其是研究豬細小病毒（PPV）、傳(chuan) 染性性胃腸炎病毒（TGE）及豬破壞病毒等指標時表現出良好的感染和抑製能力。ST細胞係重要的病毒模型，常用於(yu) 實驗室中的病毒作為(wei) 增殖、分離與(yu) 檢測。

ST細胞特性特征

• 病毒敏感性：ST細胞對多種豬病毒具有高度敏感性，包括豬小病毒（PPV）、傳(chuan) 染性胃腸炎病毒（TGE）、偽(wei) 狂犬病病毒、豬瘟病毒等。這使得ST細胞成為(wei) 病毒分離和增殖的理想宿主。
  

• 基因表達：ST細胞在感染後能夠表達與(yu) 病毒複製相關(guan) 的多種基因。

• 基因組特征：ST細胞的基因組包含能夠支持其對多種病毒感染的遺傳(chuan) 背景。研究表明，這些細胞係可能具備某些特定的受體(ti) 或輔助因子，促進病毒的附著和進入。
  

• 適應性：經過長期培養(yang) ，ST細胞表現出對環境變化的適應能力，能夠在不同的培養(yang) 條件下穩定生長。

• 疫苗生產(chan) ：ST細胞係符合世界衛生組織（WHO）關(guan) 於(yu) 用於(yu) 生物製品的傳(chuan) 代細胞的規程要求，可以用於(yu) 生產(chan) 豬瘟、豬流感等疫苗

ST細胞（豬睾丸細胞係）參數表

ST豬睾丸細胞係培養教程

收到ST細胞後的處理

• 收到ST細胞後，首先檢查運輸包裝是否完整，觀察培養(yang) 瓶內(nei) 是否存在漏液、渾濁或異常現象。
  

• 將T25培養(yang) 瓶中的ST細胞置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中，靜置2-3小時，使ST細胞逐漸恢複活力。

• 觀察ST細胞狀態，確認貼壁情況與(yu) 密度。

ST細胞複蘇步驟

• 從(cong) 液氮罐中取出ST細胞凍存管，迅速放入37℃的水浴中，持續搖動解凍，約1-2分鍾即可完全解凍。
  

• 解凍後的ST細胞立即加入4mL預溫的完全培養(yang) 基（含10%FBS的DMEM培養(yang) 基），輕輕混勻。
  

• 以1000 RPM離心4分鍾，取出上清液，保留沉澱的ST細胞。

• 用1-2 mL完全培養(yang) 基重懸ST細胞，將細胞懸液加入事先準備好的T25培養(yang) 瓶或10 cm培養(yang) 皿中，補充8 mL培養(yang) 基。
  

• 將ST細胞置於(yu) 37℃、5% CO2培養(yang) 箱中過夜培養(yang) 。

• 第二天觀察ST細胞貼壁情況，如細胞貼壁良好，廢棄去上清並更換新鮮細胞。
  

ST細胞起源

• 當ST細胞密度達到80%-90%時，即可進行傳(chuan) 代操作。通常每2-3天檢查細胞一次密度。
  

• 棄去培養(yang) 基後，用PBS清洗1-2次，以消除殘餘(yu) 血清對消化的影響。
  

• 加入1 mL胰蛋白酶-EDTA消化液（0.25%胰蛋白酶，0.53 mM EDTA），在37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾。觀察ST細胞變圓並逐漸脫落時，取出培養(yang) 瓶。

• 2-3 mL完全培養(yang) 基和胰酶消化作用，並輕輕吹打ST細胞，加入完全分散。
  

• 以1000轉離心4分鍾，棄去上清液，保留細胞沉澱。

• 用1-2 mL新鮮培養(yang) 基重懸ST細胞，並按1:2或1:3的比例分配至新的T25培養(yang) 瓶中，補充8-10 mL完全培養(yang) 基，繼續培養(yang) 。
  

ST細胞凍存

• 凍存時機：在ST細胞狀態良好、密度達到70%-80%時進行凍存操作。

• 棄去培養(yang) 基，用PBS清洗ST細胞，再加入1 mL胰酶消化細胞至變圓、脫落狀態。
  

• 加入1 mL培養(yang) 基中充分消化反應。

• 以1000轉離心4分鍾，從(cong) 而達到上清液。
  

• 用冷凍保護液（90%胎牛血清+10%DMSO）重懸ST細胞，調整濃度為(wei) 1×10^6細胞/mL。

• 將ST細胞懸液分裝至凍存管中，每管1 mL。
  

• 將凍存管裝載到程序吸取盒中，放入-80℃冰箱中吸取至少2小時，再轉移至液氮罐中長期保存。

ST細胞培養注意事項

• 無菌操作：所有操作應在無菌環境下進行，避免ST細胞感染細菌、真菌或支原體(ti) 感染。

• 培養(yang) 基選擇：建議使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yang) 基，並定期檢查ST細胞的生長狀態，及時更換宿舍。

• 細胞觀察：定期使用顯微鏡觀察ST細胞形態，確保細胞健康且生長良好。如發現汙染或異常，及時處理並更換。

• 傳(chuan) 代與(yu) 凍存頻率：建議每2-3次傳(chuan) 代進行一次ST細胞凍存，以保持細胞係的穩定性並避免細胞老化。