15P1細胞（小鼠睾丸上皮細胞） （暫不提供）

15P-1小鼠睾丸上皮細胞係是從(cong) 一種在生精上皮中表達多瘤病毒大T蛋白（PyLT）的轉基因小鼠的睾丸細胞中建立。15P1細胞表現出塞爾托利細胞的特征，包括威爾姆斯瘤（WT1）和斯蒂爾基因的轉錄。

在與(yu) 二倍體(ti) 前生殖細胞共培養(yang) 時，15P1細胞能夠支持這些細胞的減數分裂及其後續分化，最終形成表達精蛋白（Prm-1）基因的單倍體(ti) 精子細胞。在首次減數分裂開始之前，從(cong) 9天大的未成熟小鼠中提取的睾丸細胞通過與(yu) 15P-1細胞共培養(yang) ，能夠形成具有圓形精子細胞形態的單倍體(ti) 細胞四分體(ti) ，並啟動精蛋白基因的轉錄。

15P1細胞特性特征

• 15P1細胞係表現出支持細胞（Sertoli細胞）的特征，能夠支持生殖細胞的發育。

• 15P1細胞表達Wilms腫瘤（WT1）基因和Steel基因，這些基因與(yu) 生殖細胞的發育和支持功能相關(guan) 。

• 15P1細胞係展示出吞噬活性，能夠吞噬乳膠顆粒和清除死亡細胞。與(yu) 生殖細胞的相互作用可以增強其吞噬能力。
  

• 15P1細胞分泌具有廣譜抗菌活性的蛋白酶敏感物質。在富含圓形精子細胞和神經生長因子的培養(yang) 基中，其抗菌活性可提高10倍至50倍。
  

• 15P1細胞表達KL蛋白（Kit受體(ti) 的配體(ti) ），這一蛋白在支持細胞和15P1細胞中均有表達，確認了其Sertoli細胞的特性。

• 15P1細胞能夠支持二倍體(ti) 減數分裂前生殖細胞的減數分裂及其後續分化，形成表達精蛋白（Prm-1）基因的單倍體(ti) 精子細胞。
  

15P1細胞參數表

15P1小鼠睾丸上皮細胞培養教程

細胞複蘇

• 配製好複蘇所需的完全培養(yang) 基：DMEM-H（高糖） + 10% FBS + 1% P/S（青黴素-鏈黴素）。
  

• 將凍存的15P1細胞管迅速轉移至37℃水浴中解凍，避免長時間暴露在常溫下。

• 解凍完成後，立即將15P1細胞懸液（約1 mL）加入到含有4 mL預熱培養(yang) 基的離心管中，輕輕混勻。
  

• 在1000 RPM下離心4分鍾，去除上清液以清除DMSO和其他凍存保護劑。
  

• 向沉澱中加入1-2 mL新鮮培養(yang) 基，輕柔吹打以均勻分散15P1細胞，然後將細胞轉移至適當大小的培養(yang) 瓶中進行培養(yang) 。
  

細胞傳代

• 傳(chuan) 代時，先吸幹培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基。
  

• 向培養(yang) 瓶中加入3-4 mL PBS（常溫），輕輕搖動以潤洗15P1細胞，隨後吸走PBS。
  

• 加入1 mL胰酶覆蓋細胞層，輕輕晃動培養(yang) 瓶以均勻分布胰酶。將培養(yang) 瓶放入37℃培養(yang) 箱中，觀察細胞間隙變大但未完全脫落時，立即停止消化。
  

• 添加2-3 mL完全培養(yang) 基終止消化過程，並輕輕混勻細胞。
  

• 在900 RPM下離心3-5分鍾，棄去上清液。加入新鮮培養(yang) 基重懸15P1細胞，然後按所需比例分裝到新的培養(yang) 瓶中。
  

• 加入適量的完全培養(yang) 基，置於(yu) 培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 15P1細胞。
  

注意事項

• 無菌操作：始終保持無菌操作，避免15P1細胞受到汙染。

• 消化時間：嚴(yan) 格控製胰酶消化時間，不同品牌的胰酶效果可能不同，需根據經驗進行調整。

• 細胞狀態監測：定期檢查15P1細胞的形態和生長狀況，確保其健康生長。

細胞凍存

• 凍存液製備：使用55%基礎培養(yang) 基、40% FBS和5% DMSO的凍存液來保存15P1細胞。

• 凍存步驟：將15P1細胞重懸於(yu) 凍存液中，並分裝至凍存管中。在-80℃冷凍過夜後，轉移至液氮中長期保存。