TM3細胞係（小鼠睾丸間質細胞係）

TM3小鼠睾丸間質細胞係是從(cong) 雄性小鼠的Leydig細胞分離，上皮樣形態，屬於(yu) 貼壁生長的細胞係。TM3細胞係在生物醫學研究中應用廣泛，尤其是在激素研究與(yu) 細胞功能分析領域。TM3細胞係是自發性永生化的細胞係，主要用於(yu) 合成和分泌雄性激素（如睾酮）。

TM3細胞係特性特征

• 致瘤性：在免疫抑製的小鼠中，TM3細胞未顯示出致瘤性，但在半固體(ti) 培養(yang) 基中能夠形成集落。

• 基因表達：表達前列腺素F2α。表達促黃體(ti) 激素（LH）、表皮生長因子（EGF）、雄激素受體(ti) 、雌激素受體(ti) 和孕酮受體(ti) ，均為(wei) 陽性。

• TM3細胞對黃體(ti) 生成素（LH）表現出反應性，當暴露於(yu) LH時，細胞內(nei) 環磷酸腺苷（cAMP）水平顯著升高，但對卵泡刺激素（FSH）不敏感。

• 膽固醇代謝：在LH存在的情況下，TM3細胞能夠代謝膽固醇。對LH反應性的維持取決(jue) 於(yu) 血清批次。

• 由於(yu) 其對LH的特異性反應，TM3細胞廣泛應用於(yu) 生殖生物學、內(nei) 分泌研究、藥物篩選及細胞功能分析等領域。

TM3細胞係參數表

TM3小鼠睾丸間質細胞係培養教程

TM3細胞的複蘇與初代培養

• 細胞複蘇：將凍存的TM3細胞懸液（1mL）在37°C水浴中迅速解凍，避免冰晶形成對細胞造成損傷(shang) 。

• 離心清洗：解凍後的TM3細胞立即加入4mL培養(yang) 基混勻，1000rpm離心4分鍾，去除DMSO及其他冷凍保護劑。

• 細胞重懸：棄上清後加入1-2mL新鮮培養(yang) 基，輕輕吹打使TM3細胞均勻懸浮。

• 接種培養(yang) ：將TM3細胞懸液接種到T25培養(yang) 瓶中，加入8mL培養(yang) 基，並在37℃培養(yang) 箱中培養(yang) 。

• 貼壁檢查：次日換液，觀察TM3細胞的貼壁生長情況，確保細胞狀態良好。

TM3細胞的傳代操作

• 洗滌：棄去TM3細胞的舊培養(yang) 基，用無鈣鎂的PBS緩衝(chong) 液洗滌1-2次，以去除殘留的血清和代謝產(chan) 物。

• 消化處理：加入2mL 0.25%胰酶-EDTA溶液，在37°C下消化1-2分鍾，直至TM3細胞變圓並從(cong) 瓶壁脫落。

• 終止消化：在顯微鏡下觀察到TM3細胞脫落後，立即加入培養(yang) 基終止消化，避免過度消化對細胞造成損傷(shang) 。

• 重懸與(yu) 離心：將TM3細胞用6-8mL培養(yang) 基重懸後，1000rpm離心4分鍾，棄去上清。

• 傳(chuan) 代接種：根據需要，將TM3細胞按1:2至1:5的比例重新接種到新的培養(yang) 瓶中，繼續培養(yang) 。

TM3細胞培養的注意事項

• 血清使用：單一血清無法保證TM3細胞的最佳狀態，建議使用混合血清（胎牛血清和馬血清），以保持細胞的活力和功能。

• 培養(yang) 基更換：在TM3細胞運輸或長時間培養(yang) 後，使用新鮮培養(yang) 基進行細胞維護，不建議重複使用舊培養(yang) 基。

• 初次傳(chuan) 代建議：TM3細胞初次傳(chuan) 代時，建議在T25培養(yang) 瓶中按1:2的比例傳(chuan) 代，以確保細胞能夠穩定生長。

TM3細胞對LH的反應與膽固醇代謝

• TM3細胞在不同批次的血清條件下，對黃體(ti) 生成素（LH）的反應性可能會(hui) 有所不同。血清批次的變化可能顯著影響TM3細胞對LH的反應性，因此在實驗過程中保持血清批次的一致性至關(guan) 重要，以保證實驗結果的可重複性。

• 在LH的刺激下，TM3細胞能夠代謝膽固醇。LH的存在促進了TM3細胞內(nei) cAMP水平的增加，隨後激活蛋白激酶A（PKA）信號通路，導致膽固醇轉化為(wei) 類固醇激素（如睾酮）。這一代謝過程是研究TM3細胞的重要內(nei) 容，適用於(yu) 睾丸間質細胞的生理功能及其在內(nei) 分泌調節中的作用的研究。