TM4細胞（小鼠正常睾丸Sertoli細胞）

TM4細胞係是從(cong) 雄性小鼠的睾丸中分離出的正常Sertoli細胞，廣泛應用於(yu) 生物醫學研究。該細胞係來源於(yu) 11至13日齡的小鼠睾丸，屬於(yu) Sertoli細胞類型，呈上皮樣形態，能夠貼壁生長。TM4細胞對FSH刺激有反應，可增加cAMP的產(chan) 生，但對黃體(ti) 生成素（LH）無反應。與(yu) 原代培養(yang) 的支持細胞相比，TM4細胞的FSH反應性顯著降低。雖然TM4細胞係產(chan) 生的組成型纖溶酶原激活物較少，但在FSH和視黃酸的刺激下，其產(chan) 量顯著增加。

TM4細胞特性特征

• TM4細胞表達FSH受體(ti) 、雄激素受體(ti) 和孕激素受體(ti) ；表達視黃醇結合蛋白、組織纖溶酶原激活物和轉鐵蛋白

• TM4細胞對FSH有反應，cAMP產(chan) 量增加，但對LH無反應

• TM4細胞組成型纖溶酶原激活物產(chan) 量低，但可被FSH和維甲酸刺激增高

• TM4細胞在其抗原表達譜中，包括了H-Y抗原和一種與(yu) “小肌肉”相關(guan) 的蛋白質

• TM4細胞在免疫抑製小鼠中未顯示致瘤性，但能在半固體(ti) 培養(yang) 基中形成集落

• TM4細胞檢測鼠痘病毒呈陰性

TM4細胞參數表

TM4小鼠正常睾丸Sertoli細胞培養教程

TM4細胞複蘇

• 準備好DMEM/F12培養(yang) 基，加入5%胎牛血清（FBS）和1%青黴素-鏈黴素（P/S）以提供基礎營養(yang) 和抗菌保護。
  

• 在水浴中將培養(yang) 基預熱至37℃，為(wei) TM4細胞複蘇提供適宜的環境。

• 從(cong) 液氮中取出凍存的TM4細胞管，迅速放入37℃的水浴中解凍，過程中輕輕搖晃凍存管，使TM4細胞快速融化，一般在1分鍾內(nei) 完成。
  

• 解凍後立即將TM4細胞懸液轉移到含5 mL預熱培養(yang) 基的離心管中，輕輕混勻，以稀釋DMSO並保護TM4細胞。

• 在1000 RPM下離心5分鍾，去除上清液中的DMSO和其他可能的毒性物質。
  

• 向TM4細胞沉澱中加入4-6 mL預熱的完全培養(yang) 基，輕輕吹勻TM4細胞，使其均勻懸浮。

• 將TM4細胞懸液轉移到培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃、5% CO2的培養(yang) 箱中過夜培養(yang) ，使TM4細胞適應新的環境並貼壁生長。

TM4細胞傳代

• 觀察TM4細胞的形態和密度，當細胞匯合度達到80%-90%時，可以進行傳(chuan) 代操作。
  

• 小心棄去舊的培養(yang) 基，用無鈣鎂的PBS緩衝(chong) 液洗滌TM4細胞1-2次，去除殘留的血清和代謝廢物。
  

• 加入1-2 mL 0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA消化液，置於(yu) 37℃的培養(yang) 箱中消化1-2分鍾。觀察TM4細胞形態，當大部分TM4細胞變圓並脫落時，輕輕敲擊培養(yang) 瓶的側(ce) 麵以幫助TM4細胞脫離。
  

• 立即加入含10% FBS的完全培養(yang) 基終止消化，並將TM4細胞懸液吹打均勻。

• 吸出TM4細胞懸液，在1000 RPM下離心8-10分鍾，去除上清液。
  

• 加入1-2 mL完全培養(yang) 基輕輕吹勻TM4細胞，將其按1:2至1:5的比例分配到新的培養(yang) 瓶中，並補充5-6 mL新鮮培養(yang) 基。

TM4細胞培養注意事項

• 若發現TM4細胞在培養(yang) 瓶中漂浮，需檢查培養(yang) 環境是否適宜，確保培養(yang) 瓶密封良好，瓶口需使用70%乙醇消毒後平穩放置。
  

• 定期檢查TM4細胞是否有汙染，確保支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌檢測結果為(wei) 陰性。
  

• TM4細胞複蘇後三天內(nei) ，定期拍照記錄TM4細胞狀態，以便於(yu) 觀察TM4細胞的生長狀況和追蹤任何異常。
  

• 當TM4細胞生長狀態良好時，可進行TM4細胞凍存，使用無血清凍存液，將TM4細胞儲(chu) 存於(yu) 液氮中以備後續使用。