
PIEC細胞(豬髖動脈內(nei) 皮細胞)
- 來源:髖動脈內(nei) 皮
- 細胞特征:貼壁細胞 , 內(nei) 皮細胞樣
- 培養(yang) 基:RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
- 其他:基因表達:與(yu) 內(nei) 皮功能相關(guan) 的基因(如VEGF、eNOS等)在PIEC細胞中通常表現出較高的表達水平
PIEC(Porcine Iliac Endothelial Cells,豬髖動脈內(nei) 皮細胞)是一種來自豬髖動脈的內(nei) 皮細胞係,因其自發永生化特性而廣泛用於(yu) 生物醫學研究。PIEC細胞分離過程從(cong) 健康豬髖動脈中獲取內(nei) 皮組織,通過胰蛋白酶和膠原酶聯合消化法解離成單個(ge) 細胞,再通過差速貼壁法富集內(nei) 皮細胞。PIEC細胞形態呈上皮樣結構,貼壁生長。PIEC細胞被廣泛應用於(yu) 血管生物學、藥物篩選和生物材料相容性等領域的研究。
PIEC細胞特性特征
自發永生化:PIEC細胞具有自發永生化的特性,可以在體(ti) 外長期培養(yang) 而不喪(sang) 失增殖能力。
免疫表型:PIEC細胞可通過CD31和vWF(von Willebrand因子)進行鑒定,這些標誌物是內(nei) 皮細胞的特征性分子。
細胞表麵蛋白:PIEC細胞表達多種內(nei) 皮細胞相關(guan) 的表麵蛋白,如E-cadherin(上皮鈣粘蛋白),這對於(yu) 維持細胞的極性和粘附功能至關(guan) 重要。
基因表達:PIEC細胞中與(yu) 內(nei) 皮功能相關(guan) 的基因(如VEGF、eNOS等)通常表現出較高的表達水平,這些基因在血管生成和內(nei) 皮功能中起到關(guan) 鍵作用。
轉錄因子:在PIEC細胞中,某些轉錄因子的表達(如KLF2、KLF4等)與(yu) 內(nei) 皮功能密切相關(guan) ,這些轉錄因子在調控血管生成和內(nei) 皮穩態方麵發揮重要作用
PIEC豬髖動脈內皮細胞參數表
細胞名稱 | PIEC細胞(豬髖動脈內皮細胞) |
細胞別稱 | Porcine Iliac Artery Endothelial Cells |
種屬 | 豬 |
組織來源 | 髖動脈內皮 |
細胞形態 | 上皮細胞樣 |
生長方式 | 貼壁 |
自發永生化 | 是 |
無菌檢測 | 細菌、酵母、支原體均為陰性 |
病原體檢查 | HIV、乙型肝炎、丙型肝炎均為陰性 |
運輸方式 | 複蘇發貨或幹冰冷凍發貨 |
安全性 | 必須在二級生物安全台內操作,注意防護 |
培養基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S |
溫度 | 37℃ |
氣相 | 95%空氣,5%二氧化碳 |
推薦傳代比例 | 1:2 - 1:4 |
推薦換液頻率 | 每周2-3次 |
凍存液 | 55%基礎培養基 + 40% FBS + 5% DMSO |
保存條件 | 液氮存儲 |
生長曲線 | 通常在48小時內達到80%-90%匯合度 |
倍增時間 | 24-36小時 |
接種率 | 通常為1×10^4 - 1×10^5 cells/cm² |
表達標誌物 | CD31, vWF(von Willebrand因子) |
基因表達特征 | VEGF, eNOS等與內皮功能相關的基因高表達 |
應用領域 | 藥物篩選:用於評估新藥對血管內皮的影響; |
疾病模型:心血管疾病、糖尿病等相關病理過程的研究 | |
再生醫學:血管生成研究中的基礎細胞 | |
毒理學研究:化學物質對內皮細胞的毒性影響評估 |
培養教程
PIEC豬髖動脈內皮細胞培養教程
PIEC細胞複蘇
配製RPMI-1640培養(yang) 基,加入10% FBS和1%抗生素,混合均勻後在37℃水浴中預熱,以適應PIEC細胞的生長需求。
從(cong) 液氮或-80℃冰箱中取出凍存的PIEC細胞管,立即放入37℃水浴中,輕輕搖動1分鍾,直到PIEC細胞完全解凍。
將解凍的PIEC細胞迅速轉移到15 ml離心管中,加入10 ml預熱的完全培養(yang) 基,以1000 rpm離心5分鍾,棄去上清。
用2 ml完全培養(yang) 基輕輕重懸PIEC細胞,並轉移至T25培養(yang) 瓶中。
將培養(yang) 瓶放入培養(yang) 箱中,24小時後檢查PIEC細胞貼壁情況,並更換新鮮培養(yang) 基去除死細胞。
PIEC細胞傳代
當PIEC細胞達到80%-90%匯合度時,可進行傳(chuan) 代。吸棄培養(yang) 基,並用1 ml無菌PBS輕輕洗滌以去除殘留的血清,確保PIEC細胞不受幹擾。
加入1 ml 0.25%胰酶,均勻覆蓋PIEC細胞後,在37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾,觀察PIEC細胞形態變化,出現細胞變圓、鬆散時即刻停止消化。
加入1 ml完全培養(yang) 基終止消化,用移液器輕輕吹打,使PIEC細胞脫落形成單細胞懸液。
將懸液轉移至15 ml離心管中,1000 rpm離心5分鍾,棄去上清。
用新鮮的完全培養(yang) 基重懸PIEC細胞,根據實驗需求按1:2或1:3的比例轉移至新的培養(yang) 瓶中,補充培養(yang) 基後放入培養(yang) 箱繼續培養(yang) 。
PIEC細胞凍存
按照傳(chuan) 代步驟收集PIEC細胞,計數後製備濃度為(wei) 1×10^6個(ge) /ml的PIEC細胞懸液。凍存液配方為(wei) 90%完全培養(yang) 基和10% DMSO(二甲基亞(ya) 碸)。
將重懸的PIEC細胞液轉移至1.2 ml凍存管中,密封好並放入程序凍存盒中。
初步在-80℃冷凍24小時後,將PIEC細胞凍存管轉移至液氮中長期保存。
注意事項
無菌操作:整個(ge) PIEC細胞培養(yang) 過程中,始終保持無菌操作,防止細菌、真菌和支原體(ti) 汙染,確保PIEC細胞的高純度。
胰酶消化時間控製:PIEC細胞消化時間不宜過長,以免造成細胞損傷(shang) 。
培養(yang) 基更新:PIEC細胞傳(chuan) 代時應使用新鮮培養(yang) 基,避免重複使用經過多次處理的培養(yang) 基,防止營養(yang) 缺乏和汙染。
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