細胞培養(yang) 
細胞工程 
細胞生物學 
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MCF 10A細胞的推薦生長和培養(yang) 條件是什麽(me) ？
建議在T25燒瓶中用至少10 mL（或在T75燒瓶中15 mL）推薦的完全生長培養(yang) 基開始培養(yang) MCF 10A細胞。如果使用了足夠體(ti) 積的培養(yang) 基，則可以允許細胞恢複並不受幹擾地貼壁，不必在解凍後的第二天更換新的培養(yang) 基。
MCF 10A細胞作為(wei) 上皮細胞群生長，最初與(yu) 培養(yang) 物中的一些漂浮細胞輕微貼壁。這些細胞是活的，在更換培養(yang) 基時不應分離或丟(diu) 棄，應通過溫和的離心（125 x g，10分鍾）將其保留，並添加回貼壁群體(ti) 中。
密歇根癌症基金會(hui) 建立了MCF 10A細胞，使其在低鈣濃度的無血清培養(yang) 基中生長，因此在這些條件下，培養(yang) 物將不會(hui) 受益於(yu) 通常由血清提供的貼壁因子。推薦由Lonza/Clonetics Corporation提供的哺乳動物上皮基底培養(yang) 基（MEBM）和相關(guan) 添加劑培養(yang) 基必須補充100ng/ml霍亂(luan) 毒素（Sigma C-8052）。所需的EGF（包含在試劑盒中）不能過濾，因此在添加EGF後不應過濾完整的培養(yang) 基。不使用GA-1000（慶大黴素兩(liang) 性黴素B溶液），而是可以使用1%的Pen/Strep溶液。
在無血清培養(yang) 基中培養(yang) 時，去除胰蛋白酶或用大豆胰蛋白酶抑製劑中和胰蛋白酶是重要的。通過移除培養(yang) 基並用PBS衝(chong) 洗單層來亞(ya) 培養(yang) 細胞。加入3.0 mL 0.05%胰蛋白酶-0.02%EDTA（Gibco 25300或等效物），在37°C下孵育，直到細胞聚集，通常在10-15分鍾內(nei) 。為(wei) 了中和胰蛋白酶，加入3mL 0.1%大豆胰蛋白酶抑製劑的溶液。需要在125 x g下離心10分鍾以完全除去離解劑。在完整的培養(yang) 基中重新懸浮細胞顆粒，並分配到新的燒瓶中。建議傳(chuan) 代比例為(wei) 1:3至1:4。
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