原代大鼠肝竇內(nei) 皮細胞

大鼠肝竇內(nei) 皮細胞（LSECs）來源於(yu) 大鼠肝髒組織。

肝竇內(nei) 皮細胞（SEC）是肝髒中數量最多的非實質細胞，其位於(yu) 肝竇腔與(yu) 肝細胞之間，具有多項重要功能，包括物質轉運、吞噬、抗原提呈以及免疫耐受等。肝竇內(nei) 皮細胞SEC因其特殊的窗孔結構和高度通透性而具有快速交換分子的能力。在肝髒受到病原侵襲時，SEC的窗孔逐漸減少或消失，形成內(nei) 皮下基膜，從(cong) 而導致肝竇毛細血管化的過程。肝竇內(nei) 皮細胞約占肝非實質細胞總數的70%，在表型和功能上與(yu) 普通毛細血管內(nei) 皮細胞有所不同，其間缺乏細胞間連接，通透性較高，有利於(yu) 物質的交換。

大鼠肝竇內皮細胞（LSECs細胞）特征

• 肝竇內(nei) 皮細胞（SEC）是肝髒中最多的非實質細胞，位於(yu) 肝竇腔與(yu) 肝細胞之間。

• SEC具有物質轉運、吞噬、抗原提呈、免疫耐受等功能。

• SEC具有窗孔結構和高度通透性，能夠快速交換各種大小分子。

• 肝在遭到病原侵襲時，肝竇內(nei) 皮細胞的窗孔逐漸減少或消失，導致內(nei) 皮下基膜形成，形成肝竇毛細血管化。

• 肝竇內(nei) 皮細胞約占肝非實質細胞總數的70%，與(yu) 普通毛細血管內(nei) 皮細胞在表型、功能上有差異。

• 肝竇內(nei) 皮細胞之間缺乏細胞間連接，通透性高，有利於(yu) 物質交換。

大鼠肝竇內皮細胞（LSECs細胞）參數表

大鼠肝竇內皮細胞培養教程

複蘇細胞

• 將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍。

• 加入4 mL培養(yang) 基混合均勻後，在1000 rpm條件下離心3分鍾。

• 棄去上清液，加1-2 mL培養(yang) 基後吹勻。

• 將所有細胞懸液加入含適量培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。

• 第三天換液並檢查細胞密度。

細胞傳代

• 當細胞密度達到80%-90%時，可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

• 吸出T25細胞培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基，用PBS清洗細胞一次。

• 添加1 mL 0.25%胰蛋白酶消化液至T25培養(yang) 瓶中，輕微轉動培養(yang) 瓶使消化液覆蓋整個(ge) 培養(yang) 瓶底後，吸出多餘(yu) 胰蛋白酶消化液，37℃水浴1-3分鍾；在倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓後，再加入5 mL完全培養(yang) 基終止消化。

• 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種至新的T25培養(yang) 瓶，然後補充新鮮的完全培養(yang) 基至5 mL，置於(yu) 37℃、5% CO2、飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置培養(yang) 。

• 待細胞完全貼壁後進行培養(yang) 觀察，每2-3天換一次新鮮的完全培養(yang) 基。

細胞凍存

• 當細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

• 收集細胞及細胞培養(yang) 液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4分鍾，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS後進行細胞計數。

• 根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度達到5×10^6~1×10^7/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1 mL細胞懸液，並做好標識。

• 將凍存管放入-80℃冰箱，24小時後轉入液氮罐儲(chu) 存，並記錄凍存管位置以便下次取用。

培養注意事項

• 仔細閱讀細胞說明書(shu) ，了解細胞形態、所用培養(yang) 基、血清比例和所需細胞因子等信息，確保細胞培養(yang) 條件一致。

• 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵，在顯微鏡下觀察細胞狀態。運輸過程中由於(yu) 溫度變化及劇烈碰撞，部分細胞可能會(hui) 破碎形成碎片，這是正常現象。觀察好細胞狀態後，用75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中放置2-4小時。

• 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集後，900-1000 rpm離心3分鍾，棄去上清。用5 mL PBS重懸細胞，再次900-1000 rpm離心3分鍾，用新鮮的完全培養(yang) 基重懸細胞，並接種到新的培養(yang) 瓶或培養(yang) 皿中，置於(yu) 培養(yang) 箱中進行培養(yang) 。

• 注意，運輸用的培養(yang) 基（灌液培養(yang) 基）不能再用來培養(yang) 細胞，應換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的完全培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。收到細胞後第一次傳(chuan) 代建議按1:2傳(chuan) 代。

• 1:2傳(chuan) 代即一個(ge) T25瓶傳(chuan) 至兩(liang) 個(ge) T25瓶或兩(liang) 個(ge) 6 cm皿，而不是一個(ge) T25瓶傳(chuan) 至兩(liang) 個(ge) 10 cm皿。