小鼠肝竇內(nei) 皮細胞（kaiyun网站安全）

原代小鼠肝竇內(nei) 皮細胞（LSECs）分離自小鼠肝髒組織。

肝竇內(nei) 皮細胞是肝髒內(nei) 數量最多的非實質細胞，約占肝非實質細胞總數的70%。它們(men) 位於(yu) 肝竇腔與(yu) 肝細胞之間，具有物質轉運、吞噬、抗原提呈和免疫耐受等功能。由於(yu) 擁有窗孔結構、細胞間連結鬆散、內(nei) 皮下缺少基底膜，肝竇內(nei) 皮細胞具有高度通透性，能夠快速交換各種大小分子的物質。

在肝髒遭受病原侵襲時，肝竇內(nei) 皮細胞的窗孔逐漸減少或消失，內(nei) 皮下基膜形成，產(chan) 生類似於(yu) 連續型毛細血管的結構，這一過程稱為(wei) 肝竇毛細血管化。肝竇毛細血管化由多種因素引起，過程極為(wei) 複雜，常見於(yu) 多種肝病的發病前期階段。

肝竇內(nei) 皮細胞在表型和功能上與(yu) 普通毛細血管內(nei) 皮細胞有較大差異。它們(men) 之間缺乏細胞間連接，細胞下基底膜物質很少，導致竇內(nei) 皮通透性較高，有利於(yu) 物質交換。不同於(yu) 肝細胞的自我複製，新生的肝竇內(nei) 皮細胞主要來自肝內(nei) 外其他細胞成分的分化替代。不少研究證實，肝再生時的肝竇內(nei) 皮細胞具有骨髓源性替代，內(nei) 皮祖細胞是參與(yu) 這一過程的主要細胞成分。

窗孔是肝竇內(nei) 皮細胞最具特征性的結構，其大小從(cong) 小於(yu) 10納米至1～2微米不等。由於(yu) 窗孔的存在和缺乏內(nei) 皮下完整基膜的結構，肝竇壁是全身唯一缺乏基膜的毛細血管。除竇內(nei) 的血細胞外，血漿成分均能從(cong) 窗孔進入Disse間隙進行物質交換。

肝竇內皮細胞特性

• 是肝髒內(nei) 數量最多的非實質細胞，占70%。

• 位於(yu) 肝竇腔與(yu) 肝細胞之間。

• 功能：物質轉運、吞噬、抗原提呈、免疫耐受。

• 具有窗孔結構、細胞間連結鬆散、內(nei) 皮下缺少基底膜，導致高度通透性。

• 肝竇內(nei) 皮細胞窗孔減少或消失，內(nei) 皮下基膜形成，產(chan) 生類似於(yu) 連續型毛細血管的結構。

• 由多種因素引起，複雜，常見於(yu) 多種肝病發病前期。

原代小鼠肝竇內皮細胞參數表

原代小鼠肝竇內皮細胞培養方法

培養基

• 培養(yang) 基類型：Hams/F12

• 添加因子：10% FBS、VEGF、Insulin、Dexamethasone、Selenium、Transferrin、Penicillin、Streptomycin 等

使用方法

• 取出25cm2培養(yang) 瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yang) 箱中靜置6-8小時或過夜，以穩定細胞狀態。

• 當細胞達到80%匯合時，準備進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

細胞傳代

• 吸出25cm2培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基，用PBS清洗細胞一次。

• 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yang) 瓶中，37℃溫浴3分鍾左右；觀察細胞回縮變圓後吸除消化液，再加入完全培養(yang) 液終止消化。

• 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳(chuan) 代，然後補充新鮮的完全培養(yang) 基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yang) 箱中培養(yang) 。

• 待細胞完全貼壁後，進行培養(yang) 觀察。每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yang) 基。

注意事項

• 培養(yang) 基於(yu) 4℃條件下可保存3-6個(ge) 月。

• 在細胞培養(yang) 過程中，保持無菌操作。

• 傳(chuan) 代培養(yang) 過程中，注意胰酶消化時間不宜過長，以免影響細胞貼壁及其生長狀態。

• 該細胞隻可用於(yu) 科研目的。