
HSEC細胞(人肝竇內(nei) 皮細胞永生化)
- 來源:肝竇內(nei) 皮;TERT永生化
- 細胞特征:貼壁細胞 ,內(nei) 皮細胞樣
- 培養(yang) 基:內(nei) 皮細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基
- 其他:由於(yu) 缺乏細胞間連接和基底膜,HSEC-TERT細胞具有較高的通透性,適合用於(yu) 研究物質在血液與(yu) 肝實質之間的交換。HSEC-TERT細胞培養(yang) 中有見漂浮顆粒物、漂浮細胞和部分形變細胞,來源於(yu) TERT轉化和篩選過程,為(wei) 正常現象,多見於(yu) 永生化細胞。
HSEC-TERT人肝竇內(nei) 皮細胞(Hepatic Sinusoidal Endothelial Cells, HSEC)是一種通過慢病毒攜帶TERT基因而實現永生化的細胞係,起源於(yu) 人類正常肝髒組織中的原代肝竇內(nei) 皮細胞。肝竇內(nei) 皮細胞是肝髒中數量最多的非實質細胞,約占肝非實質細胞總數的70%。它們(men) 在調節血液與(yu) 肝實質之間的物質交換中發揮著重要作用。
與(yu) 普通毛細血管內(nei) 皮細胞相比,HSEC-TERT細胞缺乏細胞間連接和基底膜,具有較高的通透性,這一特性對於(yu) 肝髒的功能至關(guan) 重要。在適宜的培養(yang) 條件下,HSEC-TERT細胞係能夠穩定傳(chuan) 代至少20代以上,同時保留了肝竇內(nei) 皮細胞的主要特性,如其獨特的窗孔結構和高通透性。HSEC-TERT細胞培養(yang) 中有見漂浮顆粒物、漂浮細胞和部分形變細胞,來源於(yu) TERT轉化和篩選過程,為(wei) 正常現象,多見於(yu) 永生化細胞。
HSEC永生化細胞特性特征
高通透性:由於(yu) 缺乏細胞間連接和基底膜,HSEC-TERT細胞具有較高的通透性,適合用於(yu) 研究物質在血液與(yu) 肝實質之間的交換。
基因表達:HSEC細胞攜帶TERT基因,這一基因的引入使得細胞能夠逃避衰老和凋亡,保持增殖能力。
代謝特性:HSEC細胞能夠合成和分泌一些肝髒特異性蛋白,如白蛋白,反映其在肝髒功能方麵的特性。
HSEC人肝竇內皮細胞參數表
細胞名稱 | HSEC細胞(人肝竇內皮細胞TERT永生化) |
細胞別稱 | HSEC(TERT) |
來源 | 人類正常肝髒組織中的原代肝竇內皮細胞;攜帶TERT基因 |
細胞形態 | 內皮細胞樣 |
細胞類型 | 貼壁細胞 |
生長特性 | 適應性強,能夠在體外穩定增殖 |
生物安全等級 | 2 |
致瘤性 | 無致瘤性 |
培養條件 | 內皮細胞專用培養基 |
培養環境 | 37℃;5% CO2;飽和濕度 |
細胞簡介 | HSEC細胞是通過慢病毒攜帶TERT基因而建立的永生化細胞,合適條件下至少可以穩定傳代20代以上。 |
換液周期 | 每2-3天 |
培養基 | 內皮細胞專用培養基 |
傳代比例 | 1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定) |
凍存液 | 凍存液:55%基礎培養基+40% FBS+5% DMSO 溫度:液氮 |
凍存規格 | 200-300萬細胞/ml,1ml每管 |
細胞標誌物 | 表達血管假性血友病因子(vWF)、CD31等內皮細胞特異性標誌物 |
功能特性 | 能合成和分泌肝髒特異性蛋白,如白蛋白和糖原 |
高通透性特性 | 由於缺乏細胞間連接和基底膜,具有較高的通透性 |
研究領域 | 肝髒疾病機製研究、藥物篩選、免疫反應研究、再生醫學 適用於(yu) 肝髒相關(guan) 的生物學和病理學研究 用於(yu) 評估藥物對肝髒的代謝和毒性影響 研究肝髒內(nei) 細胞間的相互作用及其對肝髒功能的影響 |
培養教程
HSEC人肝竇內皮細胞TERT永生化培養教程
培養步驟
確保所有試劑和材料在操作前均已恢複至室溫,特別是用於(yu) HSEC細胞培養(yang) 的試劑。
使用75%酒精消毒操作台及培養(yang) 瓶外表麵,確保HSEC細胞培養(yang) 環境的無菌性。
小心吸盡培養(yang) 瓶中的舊培養(yang) 基,避免HSEC細胞幹燥。
加入3-4 ml常溫PBS,輕輕搖動以洗滌HSEC細胞,持續10-20秒,隨後吸走PBS。
向T25瓶中加入約1 ml的0.25%胰酶,輕輕搖晃培養(yang) 瓶,使胰酶均勻覆蓋HSEC細胞層。
將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中,觀察HSEC細胞開始收縮和脫離培養(yang) 基底。
當HSEC細胞間隙擴大且細胞尚未完全脫離時,可輕拍培養(yang) 瓶助脫並加入2-3 ml完全培養(yang) 基以中和胰酶作用。
輕輕混勻HSEC細胞懸液以確保均勻分布。
將HSEC細胞懸液轉移至離心管,1000 rpm離心3-5分鍾,棄去上清液。
在HSEC細胞沉澱中加入適量新鮮培養(yang) 基,輕輕重懸HSEC細胞。
將HSEC細胞均勻分配至新的培養(yang) 瓶中。
添加適量的完全培養(yang) 基,確保HSEC細胞在合適的環境中生長。
將培養(yang) 瓶放回37℃培養(yang) 箱中,繼續培養(yang) HSEC細胞。
注意事項
消化時間:不同品牌胰酶的活性可能有所不同,因此應嚴(yan) 格控製HSEC細胞的消化時間。建議每30秒觀察HSEC細胞狀態,避免過度消化。
HSEC細胞狀態監測:在傳(chuan) 代和換液過程中,密切關(guan) 注HSEC細胞狀態,避免HSEC細胞過度聚集或大麵積脫落。
培養(yang) 基更換:每2-3天更換培養(yang) 基,以保持HSEC細胞生長的最佳環境。
傳(chuan) 代比例:根據HSEC細胞的生長密度和狀態,通常采用1:2至1:4的傳(chuan) 代比例。
HSEC細胞凍存:如需凍存HSEC細胞,建議使用培養(yang) 基+45% FBS + 5% DMSO的凍存液。在凍存前,應確保HSEC細胞充分消化並通過離心收集。