JHH-7細胞（人肝癌細胞）

JHH-7細胞係是由日本千葉醫科大學肝癌研究所於(yu) 1986年建立的，來源於(yu) 一名53歲日本男性患者的肝髒組織。患者患有肝細胞癌，並且病史顯示為(wei) HBsAg陽性，伴有肝硬化。患者的血清學指標包括HBsAg（+），HBsAb（-），HBeAg（-），HBeAb（+），HBc-Ab（+），以及AFP高水平（110000 ng/mL）。
JHH-7細胞係是從(cong) 肝硬化並發肝細胞癌的患者肝髒腫瘤組織中建立的，並攜帶部分乙肝病毒基因片段。

JHH-7細胞特性特征

• 遺傳(chuan) 特征：JHH-7細胞係中觀察到HBV（乙型肝炎病毒）DNA的整合現象，但整合的HBV基因組不完整，因此不產(chan) 生乙肝病毒。

• PCR檢測結果顯示乙肝病毒基因組片段呈陽性，JHH-7細胞可能攜帶部分病毒基因組。

• HindIII酶切分析顯示6.0Kb和2.5Kb的DNA片段，進一步支持HBV DNA的整合特征。
  

• JHH-7細胞係在基因表達方麵表現出與(yu) 肝癌相關(guan) 的多種基因的異常表達，這使其成為(wei) 研究肝癌生物學特性的理想模型

JHH-7人肝癌細胞參數表

JHH-7人肝癌細胞培養教程

JHH7細胞複蘇步驟

• 迅速將凍存的JHH7細胞懸液（1 mL）置於(yu) 37℃水浴中，持續輕輕搖動至完全解凍。
  

• 解凍後，立即將JHH7細胞懸液加入到4 mL預溫的培養(yang) 基中，並輕輕混勻。

• 將JHH7細胞懸液置於(yu) 1000 rpm下離心3分鍾，棄去上清液。
  

• 加入1-2 mL新鮮培養(yang) 基，輕輕吹打混勻JHH7細胞。

• 將所有JHH7細胞懸液轉移至培養(yang) 瓶或培養(yang) 皿中，培養(yang) 基的體(ti) 積約為(wei) 8 mL，並在37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 過夜。
  

• 第二天更換培養(yang) 基，觀察並記錄JHH7細胞密度和狀態。

JHH7細胞傳代步驟

• 當JHH7細胞生長密度達到80%-90%時，開始進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
  

• 棄去培養(yang) 上清，用無鈣、無鎂的PBS緩衝(chong) 液潤洗JHH7細胞1-2次。
  

• 在培養(yang) 瓶中加入1 mL 0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA消化液，確保消化液覆蓋所有JHH7細胞。
  

• 短暫棄去消化液，將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中，觀察JHH7細胞的消化狀態，通常1-2分鍾。

• 當大部分JHH7細胞變圓並開始脫落時，立即加入培養(yang) 基終止消化並輕輕敲擊培養(yang) 瓶以幫助細胞脫落。

• 補充6-8 mL培養(yang) 基，混勻後將JHH7細胞懸液轉移至無菌離心管中，1000 rpm離心4分鍾，棄去上清。
  

• 使用1-2 mL新鮮培養(yang) 基重懸JHH7細胞，輕輕吹勻。
  

• 按1:2比例將JHH7細胞懸液分裝至新的培養(yang) 瓶或培養(yang) 皿中，加入8 mL培養(yang) 基後繼續在培養(yang) 箱中培養(yang) 。

JHH7細胞凍存步驟

• JHH7細胞生長良好時，將細胞懸液與(yu) 培養(yang) 基一同收集至無菌離心管中，1000 rpm離心4分鍾，棄去上清，並用PBS清洗JHH7細胞一次。
  

• 進行JHH7細胞計數，確保細胞密度在5×10⁶至1×10⁷/mL之間。
  

• 根據JHH7細胞數量加入無血清凍存液，輕輕混勻。每個(ge) 凍存管中分裝1 mL細胞懸液，並做好標識。
  

• 將JHH7細胞凍存管置於(yu) -80℃冰箱中24小時後，轉移至液氮罐中長期儲(chu) 存，並記錄凍存管的位置以便後續取用。
  

注意事項

• 無菌操作：在整個(ge) JHH7細胞實驗過程中，需嚴(yan) 格保持無菌操作以防止細胞汙染。

• 消化時間控製：消化步驟中要特別注意時間，避免過度消化導致JHH7細胞損傷(shang) 或死亡。

• 細胞狀態監控：定期檢查JHH7細胞的生長狀態，及時進行傳(chuan) 代或凍存，以維持細胞的最佳狀態。