細胞培養(yang) 之細胞計數方法

細胞培養(yang) 之細胞計數方法
細胞計數對於(yu) 確定或監測生長率以及建立已知細胞數的新培養(yang) 物是必不可少的。血細胞計數器通常用於(yu) 估計細胞數和確定細胞活力。血細胞計數器是一種相當厚的玻璃載玻片,帶有兩(liang) 個(ge) 計數室,每側(ce) 一個(ge) 。每個(ge) 計數室都有一個(ge) 鏡麵,其中有 3 × 3 毫米的網格,其中包含 9 個(ge) 計數方格。(見圖。)計數室的側(ce) 麵凸起,可將蓋玻片固定在距計數室底部恰好 0.1 毫米的位置。9 個(ge) 計數方格中的每一個(ge) 可容納 0.0001 毫升的體(ti) 積。
血球計數器非常適合測定細胞活力,但由於(yu) 實際計數的細胞數量相對較少,因此無法精確測定細胞數量。自動計數器將生成最可靠的數據,尤其是與(yu) 血球計數器的活力數據結合使用時。
按照下列步驟計數細胞:
清潔、徹底幹燥血細胞計數器並將其與(yu) 蓋玻片一起組裝。
將少量細胞懸浮液轉移到兩(liang) 個(ge) 計數室的邊緣。讓細胞懸浮液通過毛細管作用被吸入計數室。
將血細胞計數器放在倒置顯微鏡下,以 100 倍放大倍數觀察細胞。
重點關(guan) 注圖中標記為(wei) 1、2、3 和 4 的象限。
記錄每個(ge) 切片中的細胞數。計算細胞數的平均值,然後乘以稀釋倍數。如果細胞未經稀釋,則該倍數為(wei) 10 4 個(ge) 細胞/毫升。從(cong) 細胞懸浮液中取出後,對樣本進行的任何稀釋(例如使用活體(ti) 染色)均需計入計算中。
例如,如果四個(ge) 計數分別為(wei) 60、66、69 和 75,則裝入血細胞計數器的樣本濃度為(wei) 68 × 10 4 個(ge) 細胞/毫升。為(wei) 獲得最佳結果,請調整懸浮液濃度,使四個(ge) 部分中各有 50 至 100 個(ge) 細胞。
大多數培養(yang) 物將在初始接種細胞濃度為(wei) 10 3至 10 4 個(ge) 細胞/cm 2時生長。生長較快的培養(yang) 物通常設置在較低的濃度下。有些培養(yang) 物除非最初添加最低濃度的細胞,否則生長不良
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