NPC/HK1細胞（人鼻咽癌細胞）

NPC/HK-1人鼻咽癌細胞係是從(cong) 一位58歲中國男性鼻咽鱗狀細胞癌患者的複發性腫瘤組織中分離。患者在接受放射治療後，經曆了長達17年半的病情緩解期，隨後出現複發。這一細胞係由中南大學基礎醫學院的研究團隊成功建立，並經過多次傳(chuan) 代，目前已傳(chuan) 代72次。

NPCHK-1細胞係的形態呈上皮樣，具有典型的貼壁生長特征。核型分析顯示NPCHK1細胞係為(wei) 非整倍體(ti) ，染色體(ti) 數為(wei) 74，並存在數量和結構上的畸變。

NPCHK1細胞特性特征

• 病毒狀態: NPC/HK-1細胞係被認為(wei) 是EB病毒陰性，未檢測到Epstein-Barr病毒核抗原（EBNA）。
  

• 細胞標記物: NPCHK1細胞係在多項研究中顯示出特定的腫瘤標記物表達，尤其是在與(yu) 鼻咽癌相關(guan) 的信號通路中，表現出較高的AXL蛋白表達，這與(yu) 細胞的增殖、遷移和侵襲能力密切相關(guan) 。

• 腫瘤形成: 在移植到裸鼠（BALB/c nu/nu）背部後，NPC/HK-1能夠形成與(yu) 患者原始腫瘤相似的腫瘤組織，組織學檢查顯示為(wei) 分化良好的鱗狀細胞癌。

NPCHK1細胞參數表

NPC/HK1人鼻咽癌細胞培養教程

傳代方法

• 輕輕吸除T25培養(yang) 瓶中的舊培養(yang) 基，以防NPCHK1細胞長時間暴露在廢棄培養(yang) 基中。

• 加入3-4 ml的溫PBS，輕輕衝(chong) 洗NPCHK1細胞10-20秒，隨後吸除PBS。

• 加入約1 ml胰酶，輕輕晃動培養(yang) 瓶，使胰酶均勻覆蓋NPCHK1細胞層。

• 將培養(yang) 瓶放置於(yu) 37°C培養(yang) 箱中，進行NPCHK1細胞的消化處理。

• 當NPCHK1細胞間隙變大但尚未完全脫落時，加入2-3 ml完全培養(yang) 基以終止消化。

• 輕柔吹打混勻NPCHK1細胞，900 rpm離心3-5分鍾，棄去上清。

• 用新鮮的完全培養(yang) 基重懸NPCHK1細胞，並均勻接種到新培養(yang) 瓶中。

• 補充新鮮的培養(yang) 基，將NPCHK1細胞放回培養(yang) 箱中靜置培養(yang) 。

注意事項

• 控製胰酶消化時間，避免過度消化以防止NPCHK1細胞損傷(shang) 。

• 吹打NPCHK1細胞時要輕柔，避免產(chan) 生氣泡，這可能會(hui) 影響NPCHK1細胞的健康。

• 每2-3天更換一次培養(yang) 基，確保NPCHK1細胞獲得足夠的營養(yang) 。

凍存方法

• 凍存液配方: 60%基礎培養(yang) 基 + 30% FBS + 10% DMSO

• 凍存規格: 每管凍存NPCHK1細胞數為(wei) 200-300萬(wan) 細胞/ml，每管1 ml

• 按上述傳(chuan) 代方法消化NPCHK1細胞，並通過離心獲得NPCHK1細胞沉澱。
  

• 將NPCHK1細胞沉澱輕輕重懸於(yu) 預配好的凍存液中。

• 將NPCHK1細胞懸液迅速轉移至標記好的凍存管中。

• 將凍存管置於(yu) 程序凍存盒中，放入-80°C冰箱中過夜，次日轉移至液氮中長期保存。

• 如果缺乏程序凍存設備，可將凍存管先置於(yu) 4°C靜置5-10分鍾，再在-20°C靜置2小時，最後轉入-80°C冰箱中過夜。

複蘇與培養

• 從(cong) 液氮中迅速取出NPCHK1細胞凍存管，在37°C水浴中解凍，輕輕搖晃直至冰塊完全融化。

• 將NPCHK1細胞懸液轉移至15 ml離心管，加入9 ml培養(yang) 基。

• 900 rpm離心5分鍾，棄去上清，用5 ml培養(yang) 基重懸NPCHK1細胞。

• 將NPCHK1細胞懸液接種至T25培養(yang) 瓶中，放入培養(yang) 箱中培養(yang) 。

• 次日更換培養(yang) 基，去除未貼壁的死細胞和殘餘(yu) 的DMSO。

• 當NPCHK1細胞貼壁並穩定生長後，根據NPCHK1細胞的生長情況進行傳(chuan) 代。