NP69細胞（人永生化鼻咽上皮細胞）

NP69細胞係是從(cong) 男性鼻咽部組織中分離出的原代鼻咽上皮細胞，通過轉染攜帶SV40大T抗原的PX8質粒而獲得的永生化細胞。NP69細胞保留了許多正常鼻咽上皮細胞的生物學特性，如角蛋白表達譜和對TGF-β的響應，同時也呈現出在鼻咽癌（NPC）中常見的多種遺傳(chuan) 特征。

NP69細胞係為(wei) 非腫瘤性細胞，依賴貼壁生長。在研究與(yu) 病毒相關(guan) 的腫瘤發生機製，特別是在東(dong) 南亞(ya) 地區高發的鼻咽癌的研究中具有重要應用價(jia) 值。鼻咽癌的發病與(yu) 病毒因素密切相關(guan) ，特別是EB病毒（EBV）和人乳頭瘤病毒（HPV）。

NP69細胞SV40永生化鼻咽細胞特性特征

角蛋白譜：NP69細胞保留了正常鼻咽細胞的角蛋白譜。

對TGF-β反應：NP69細胞對轉化生長因子β（TGF-β）的反應性與(yu) 正常鼻咽細胞相似。

遺傳(chuan) 特征：NP69細胞具有在鼻咽癌（NPC）中觀察到的許多遺傳(chuan) 特征，在研究與(yu) 病毒相關(guan) 的腫瘤發生機製時具有重要的應用價(jia) 值。

非致瘤性：NP69細胞被認為(wei) 是非致瘤性的，適合在實驗室中進行安全操作.

NP69細胞參數表

NP69細胞人SV40永生化鼻咽上皮細胞培養教程

NP69細胞複蘇

• 將基礎培養(yang) 基與(yu) 10-20%的FBS和1%的抗生素混合，製備NP69細胞的完全培養(yang) 基。
  

• 迅速從(cong) 液氮中取出凍存的NP69細胞，將其立即置於(yu) 37℃水浴中，快速搖動使其均勻解凍，解凍時間控製在1分鍾以內(nei) 。
  

• 將解凍後的NP69細胞轉移到15ml離心管中，加入5ml預熱的完全培養(yang) 基，1000rpm離心5分鍾，以去除凍存液中的DMSO。
  

• 小心吸棄上清液，加入2ml預熱的完全培養(yang) 基，輕柔地重懸NP69細胞。
  

• 將重懸的NP69細胞轉移至T25培養(yang) 瓶中，放入37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 。
  

• 24小時後檢查NP69細胞的貼壁情況，如果NP69細胞未能貼壁，可能是死細胞，需更換新鮮培養(yang) 基並再次培養(yang) 。
  

NP69細胞傳代

• 當NP69細胞生長達到80%-90%匯合度時，準備進行傳(chuan) 代操作。
  

• 吸棄舊培養(yang) 基，加入1ml無菌PBS輕輕洗滌NP69細胞，去除殘留培養(yang) 基。
  

• 加入1-2ml預熱的胰蛋白酶，37℃下消化2-5分鍾，直至NP69細胞變圓並開始脫落。
  

• 加入等量的完全培養(yang) 基以終止對NP69細胞的消化反應。
  

• 將NP69細胞懸液轉移至離心管中，1000rpm離心5分鍾，吸棄上清。
  

• 用2-5ml完全培養(yang) 基重懸NP69細胞，並按1:2至1:4的比例接種至新培養(yang) 瓶中，繼續在37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 。
  

NP69細胞凍存

• 按比例配製凍存液，確保DMSO均勻混合，以適應NP69細胞的凍存需求。

• 在傳(chuan) 代過程中，收集培養(yang) 好的NP69細胞，並離心處理以去除培養(yang) 基。
  

• 用凍存液將NP69細胞重懸，確保每管含有約1×10^6個(ge) NP69細胞。
  

• 將NP69細胞懸液分裝至凍存管中，標記清楚，先在-80℃冷凍24小時，然後轉移至液氮中長期保存。

注意事項

• 培養(yang) 基使用：使用專(zhuan) 用的NP69細胞培養(yang) 基，以確保NP69細胞獲得最適合的生長環境，避免與(yu) 其他細胞係共用培養(yang) 基。

• 細胞操作：在NP69細胞傳(chuan) 代和複蘇過程中，避免強烈的機械攪拌或過度移動，以減少對NP69細胞的損傷(shang) 。

• 生物安全：所有操作應在二級生物安全櫃內(nei) 進行，確保實驗者的安全和NP69細胞的無菌性。

• 在NP69細胞的培養(yang) 過程中，建議根據實驗需求，加入1%的生長因子至培養(yang) 基中。這些生長因子可以包括：

• 表皮生長因子（EGF）：促進NP69細胞增殖與(yu) 生長。

• 轉化生長因子β（TGF-β）：調控NP69細胞增殖與(yu) 分化。

• 其他細胞因子：如肝細胞生長因子（HGF）或胰島素，可根據研究的具體(ti) 需求進行選擇。