收到細胞培養(yang) 物後的處理方法

大多數細胞以培養(yang) 容器的形式運輸。在這些容器中接種細胞，進行培養(yang) 以確保細胞生長。

收到培養(yang) 瓶後，目視檢查培養(yang) 基是否有微生物汙染，這包括異常的 pH 值變化（酚紅導致的黃色或紫色）、渾濁度或顆粒。使用低倍倒置顯微鏡（100 倍）檢查培養(yang) 基是否有微生物汙染的證據以及細胞的形態。查看有關(guan) 檢查細胞培養(yang) 物的更多詳細信息。

如果細胞貼壁並在單層中生長：

用無菌方法去除所有培養(yang) 基，隻留下 5 mL 至 10 mL。培養(yang) 基可以保存以供重複使用，並應儲(chu) 存在 4°C 下。

將培養(yang) 瓶按照產(chan) 品說明書(shu) 推薦的溫度和 CO 2濃度進行培養(yang) （對於(yu) 大多數細胞係，培養(yang) 溫度為(wei) 37°C，CO 2濃度為(wei) 5% ），直至細胞進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

如果細胞未貼壁或懸浮生長：

• 將燒瓶中的所有培養(yang) 物無菌轉移到離心管中。

• 以 125 × g 的速度離心 5 至 10 分鍾。

• 除去 10 mL 的培養(yang) 基上清液，重新懸浮細胞。將剩餘(yu) 的培養(yang) 基儲(chu) 存在 4°C 下以備後用。

• 根據細胞係，將重懸的細胞無菌轉移至 25 cm2燒瓶或 75 cm2燒瓶中。

• 在產(chan) 品信息表上推薦的溫度和 CO 2濃度下培養(yang) 細胞，直至細胞傳(chuan) 代培養(yang) 。

大多數細胞係都是從(cong) 一片切碎或酶分散的組織中衍生的原代培養(yang) 物開始的。原代培養(yang) 物是幾種細胞類型的混合物，保留了其來源組織的特征。

一段時間後，原代培養(yang) 的細胞將達到匯合狀態，即由於(yu) 細胞擴增，培養(yang) 容器的所有可用空間都處於(yu) 被覆蓋的狀態。此時，需要將培養(yang) 物分解（通常使用胰蛋白酶等蛋白水解酶）成單個(ge) 細胞並進行傳(chuan) 代培養(yang) （分裂、傳(chuan) 代或轉移）。在第一次傳(chuan) 代之後，培養(yang) 物通常被稱為(wei) 細胞係。隨著每次後續傳(chuan) 代培養(yang) ，細胞群變得更加均質，因為(wei) 生長較快的細胞占主導地位。也可以通過克隆從(cong) 培養(yang) 物中選出具有所需特性的細胞。

二倍體(ti) 細胞係很少能超過幾次群體(ti) 倍增。它們(men) 的複製能力有限，在 20 到 80 次群體(ti) 倍增後開始減慢並最終停止分裂。1最近的證據表明，在細胞培養(yang) 中觀察到的一些細胞衰老可能是由於(yu) 培養(yang) 條件不適當，而不是預定的複製性衰老。2還有一些數據支持某些物種（尤其是人類）的細胞即使在改善的培養(yang) 條件下生長也會(hui) 出現複製性衰老。這種衰老是由每次細胞分裂時染色體(ti) 末端（端粒）的縮短引起的。

相反，連續（或永生化）細胞係具有無限的複製能力。這些細胞係是通過多種方式中的一種永生化或轉化而來的。許多連續細胞係來自腫瘤組織。大多數細胞係都是連續的，但少數細胞係，如 CCD-1117Sk 人皮膚成纖維細胞 或 CCD-18Co 人結腸細胞是有限的。

如培養(yang) 容器部分所述，細胞係要麽(me) 貼壁在表麵（錨定依賴性），要麽(me) 懸浮生長（錨定不依賴性）。當細胞在單層或懸浮狀態下生長和分裂時，它們(men) 通常遵循由四個(ge) 階段組成的特征生長模式：滯後、對數或指數、穩定或穩定和衰退。

• 滯後階段——在培養(yang) 容器中接種後，細胞會(hui) 立即緩慢生長，同時從(cong) 傳(chuan) 代培養(yang) 的壓力中恢複過來。

• 對數期或指數期——細胞進入指數生長期，持續至整個(ge) 生長表麵被占據或細胞濃度超過培養(yang) 基的容量。

• 穩定期——細胞增殖減慢直至停止。

• 衰退期——如果不更換培養(yang) 基且細胞數量沒有減少，細胞就會(hui) 失去活力，數量也會(hui) 減少。

為(wei) 了確保細胞活力、遺傳(chuan) 穩定性和表型穩定性，需要將細胞係保持在指數期。這意味著在細胞進入穩定生長期之前、單層細胞 100% 匯合之前或懸浮液達到其最大推薦細胞密度之前，需要定期對其進行傳(chuan) 代培養(yang) 。為(wei) 每個(ge) 細胞係生成生長曲線有助於(yu) 確定細胞係的生長特性。