ANA-1細胞（小鼠巨噬細胞）

ANA-1細胞係是一種通過J2重組逆轉錄病毒感染並永生化處理的C57BL/6（H-2b）小鼠骨髓細胞衍生的細胞係。ANA-1細胞係具有雙重生長模式，即既能在貼壁狀態下生長，也能以懸浮形式存在。ANA-1細胞在形態上類似於(yu) 巨噬細胞，常表現出顯著的空泡形成和偏心的細胞核。

ANA-1小鼠巨噬細胞特性特征

• 分子特征：表達FcyR（Ly-17）、Mac-1、Ly-5、熱穩定抗原（HSA）、Ly5.1和Ly6B、持續表達溶菌酶

• 功能特征：表現出非常高的吞噬活性、在脂多糖（LPS）處理時具有腫瘤活性、屬於(yu) 骨髓單核細胞譜係

• 基因特征：由C57BL/6（H-2b）小鼠骨髓細胞經J2重組逆轉錄病毒感染後永生化而來

• 免疫學特征：表達多種巨噬細胞相關(guan) 的表麵標誌物，如FcyR、Mac-1等、可能參與(yu) 免疫反應和炎症過程

ANA-1細胞參數表

ANA-1小鼠巨噬細胞培養教程

ANA-1細胞複蘇

• 快速解凍：將含有1mL ANA-1細胞懸液的凍存管置於(yu) 37℃水浴中快速解凍，時間為(wei) 1-2分鍾。

• 轉移：將解凍後的ANA-1細胞懸液轉移到一個(ge) 含有4-9mL培養(yang) 基的15mL離心管中。

• 離心：以1000rpm離心4-5分鍾，棄去上清液。

• 重懸細胞：用1-2mL新鮮培養(yang) 基重懸ANA-1細胞。

• 初步培養(yang) ：將ANA-1細胞懸液轉移到一個(ge) 含有5-6mL培養(yang) 基的T25培養(yang) 瓶中。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO2的培養(yang) 箱中培養(yang) 過夜。

ANA-1細胞培養

• 培養(yang) 基：90% RPMI-1640或DMEM，補充10%胎牛血清（FBS）和1%雙抗（青黴素-鏈黴素）。

• 培養(yang) 條件：37℃，5% CO2，95%空氣。

• 換液頻率：每2-3天更換ANA-1細胞培養(yang) 基。

ANA-1細胞傳代

• 傳(chuan) 代條件：當ANA-1細胞密度達到80%-90%時進行傳(chuan) 代。

• 清洗細胞：棄去ANA-1細胞培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

• 細胞消化：吸取細胞上清中的懸浮細胞，並添加新鮮培養(yang) 基輕吹拍打培養(yang) 瓶以促進細胞脫落。

• 離心和重懸：將ANA-1細胞懸液轉移到無菌離心管中，1000rpm離心4分鍾，棄去上清。

• 用新鮮培養(yang) 基重懸ANA-1細胞。

• 接種和培養(yang) ：按1:2-1:3的比例將ANA-1細胞接種到新的培養(yang) 瓶中。

• 將培養(yang) 瓶放入37℃、5% CO2培養(yang) 箱中繼續培養(yang) ANA-1細胞。

ANA-1細胞培養注意事項

• 傳(chuan) 代比例：首次傳(chuan) 代建議使用1:2的比例，即一個(ge) T25瓶傳(chuan) 至兩(liang) 個(ge) T25瓶或兩(liang) 個(ge) 6cm培養(yang) 皿。

• 培養(yang) 基和換液：使用90% RPMI-1640或DMEM，加入10% FBS和1%雙抗；每2-3天換液ANA-1細胞培養(yang) 基。

• 細胞狀態：定期觀察ANA-1細胞健康狀態，確保其保持巨噬細胞樣形態，並注意其貼壁和懸浮的混合生長特性。

• 無菌操作：確保所有步驟在無菌條件下進行，避免ANA-1細胞汙染。

ANA-1細胞凍存

• 細胞收集：收集生長狀態良好的ANA-1細胞。

• 準備凍存液：凍存液由50% RPMI-1640、45% FBS和5% DMSO組成。

• 凍存步驟：將ANA-1細胞懸浮在凍存液中，快速分裝到凍存管中。

• 置於(yu) -80℃冰箱中保存24小時後，轉入液氮中進行長期保存。