OP9細胞（小鼠骨髓基質細胞）

OP9細胞起源於(yu) 新生的(C57BL/6 x C3H)F2 -op/op小鼠的顱蓋骨。這種小鼠因M-CSF基因突變，無法生成功能性巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）。

OP9細胞的優(you) 勢在於(yu) 其不需要外源生長因子或複雜的胚胎結構即可實現共培養(yang) ，從(cong) 而為(wei) 研究造血細胞的發育和分化機製提供了簡便的係統。廣泛應用在免疫學和幹細胞研究，尤其是在探索體(ti) 外誘導造血分化的過程。

OP9小鼠骨髓基質細胞特性特征

• 基因突變：OP9細胞小鼠因編碼巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）基因中的突變，無法生成功能性M-CSF。

• M-CSF缺失：OP9細胞缺乏功能性M-CSF的表達。M-CSF通常對胚胎幹細胞（ES細胞）向非巨噬細胞血細胞的分化具有抑製作用，因此OP9細胞能夠有效促進胚胎幹細胞向紅細胞、髓係細胞和B細胞譜係的分化。

• 共培養(yang) ：OP9細胞可與(yu) 小鼠胚胎幹細胞共培養(yang) ，誘導其分化為(wei) 多種血細胞類型，包括紅細胞、髓係細胞和B細胞。

• 研究價(jia) 值：該細胞係的獨特性使其成為(wei) 研究造血細胞發育和分化機製的重要工具，尤其在免疫學和幹細胞研究中具有廣泛應用

OP9細胞參數表

OP9小鼠骨髓基質細胞培養教程

OP9細胞的收貨處理

• 消毒：收到OP9細胞後，使用75%酒精消毒培養(yang) 瓶的外壁，以防止外界汙染。

• 恢複：將OP9細胞培養(yang) 瓶（如T25）放入37°C的培養(yang) 箱中穩定2-4小時，以幫助細胞恢複最佳狀態。

• 觀察：使用4X或5X顯微鏡觀察OP9細胞狀態，確認貼壁和細胞活力，必要時記錄並拍照（10×和20×顯微鏡下各2-3張）保存。

OP9細胞狀態確認

• 初始貼壁觀察：在培養(yang) 箱中放置2-3小時後，檢查OP9細胞的貼壁情況及活性。

• 細胞密度調整：如果OP9細胞密度較低（低於(yu) 60%），建議更換培養(yang) 基。去除舊的培養(yang) 基，加入6-8 mL新鮮的完全培養(yang) 基，繼續在37°C培養(yang) 箱中培養(yang) 。

OP9細胞的傳代培養

• 傳(chuan) 代時機：當OP9細胞覆蓋度達到70%-80%時，進行傳(chuan) 代培養(yang) 。此時，細胞處於(yu) 快速生長期，適合擴增。

• 傳(chuan) 代比例：通常采用1:2的比例進行首次傳(chuan) 代，即一個(ge) T25瓶的OP9細胞可傳(chuan) 代至兩(liang) 個(ge) T25瓶或兩(liang) 個(ge) 6 cm培養(yang) 皿。

傳代步驟

• 洗滌：棄去培養(yang) 基，使用無鈣、無鎂的PBS緩衝(chong) 液洗滌OP9細胞1-2次，以去除殘留物和浮遊細胞。

• 消化：加入1 mL消化液（0.25%胰蛋白酶 + 0.02% EDTA），輕輕搖動，使消化液均勻覆蓋OP9細胞。將培養(yang) 瓶置於(yu) 37°C培養(yang) 箱中消化1-3分鍾，期間密切觀察OP9細胞的消化情況。

• 終止消化：當OP9細胞開始脫離培養(yang) 瓶底部時，立即加入等體(ti) 積的完全培養(yang) 基以終止消化過程。

• 離心：將消化後的OP9細胞懸液轉移至離心管，離心1000 rpm，持續5分鍾。棄去上清，保留細胞沉澱。

• 重懸與(yu) 接種：將細胞沉澱重懸於(yu) 新鮮的完全培養(yang) 基中，按照適當的密度接種到新的培養(yang) 瓶中。

OP9細胞的培養條件

• 培養(yang) 基：使用MEM-α培養(yang) 基，添加20%胎牛血清和1%抗生素/抗真菌劑（P/S），以保證OP9細胞的營養(yang) 需求和抗感染能力。

• 培養(yang) 環境：維持培養(yang) 環境為(wei) 95%空氣和5%二氧化碳的氣相，溫度恒定在37°C，以確保OP9細胞的最佳生長條件。

OP9細胞培養的注意事項

• 細胞密度管理：應保持OP9細胞密度在4 x 10³ ~ 1 x 10⁴ cells/cm²之間，以確保細胞最佳的生長狀態。密度過高或過低均會(hui) 影響OP9細胞的健康。

• 支原體(ti) 檢測：定期進行支原體(ti) 檢測，以防止支原體(ti) 汙染，影響OP9細胞的實驗結果。

• 培養(yang) 基更換：每3天更換一次培養(yang) 基，確保OP9細胞有充足的營養(yang) 供應和適宜的生長環境。

OP9細胞的凍存與複蘇

• 凍存：將OP9細胞使用無血清凍存液分裝至凍存管中，逐步降溫至-80°C後轉入液氮中長期保存。

• 複蘇：將凍存的OP9細胞置於(yu) 37°C水浴中快速複蘇，隨即將細胞轉移至含有新鮮完全培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中，繼續培養(yang) 。