HS-5細胞（人骨髓基質細胞）

HS-5人骨髓基質細胞是一種源自一名30歲白人男性骨髓基質的細胞係，呈現典型的成纖維細胞形態。HS-5細胞係通過使用表達 HPV-16 E6/E7 蛋白的逆轉錄病毒載體(ti) （LXSN16E6E7）進行轉化，轉化過程中使用了聚乙烯吡咯烷酮（polybrene）來增強感染效率。通過這一技術，HS-5細胞具備永生化特性，並可支持造血祖細胞的增殖，即便在無外源性因子的血清剝奪培養(yang) 基中共培養(yang) 時依然能夠實現。
HS-5細胞的轉化過程最終篩選出27個(ge) 不死化克隆，分別編號為(wei) HS-1 到 HS-27，HS-5 被選定為(wei) 主要研究對象。

HS-5細胞特性特征

• 分子特征：HS-5細胞通過轉化技術獲得，使用了HPV-16 E6/E7基因表達來實現永生化。HS-5細胞能夠在無外源因子的血清剝奪培養(yang) 基中支持造血祖細胞的增殖。

• 基因表達：粒細胞集落刺激因子（G-CSF）、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）、巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）、試劑盒配體(ti) （KL）、巨噬細胞抑製蛋白-1α

• 白細胞介素家族：IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-6、IL-8、IL-11、白血病抑製因子

• HS-5細胞是多能性骨髓基質細胞，能夠分化為(wei) 成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞及其他類型的結締組織細胞，且在細胞培養(yang) 中以貼壁方式生長。
  

HS-5細胞參數表

HS-5人骨髓基質細胞培養教程

HS5細胞複蘇

• 預熱完全培養(yang) 基：將DMEM完全培養(yang) 基在37°C水浴中預熱，以確保HS5細胞複蘇時的環境適宜。
  

• 快速化凍：從(cong) 液氮罐或-80°C冰箱中取出凍存的HS5細胞，迅速放入37°C的水浴中，使細胞懸液快速化凍，通常需要約1-2分鍾。注意避免HS5細胞長時間暴露於(yu) 高溫中。

• 離心清洗：將解凍後的HS5細胞移入15 ml離心管，加入5 ml預熱的完全培養(yang) 基混勻後，以1000 rpm離心5分鍾，去除冷凍保存液。

• 重懸HS5細胞：棄去上清後，加入2 ml完全培養(yang) 基輕輕重懸HS5細胞。

• 接種培養(yang) ：將重懸後的HS5細胞轉移至T25培養(yang) 瓶中，加入適量完全培養(yang) 基，並放入37°C、5% CO₂培養(yang) 箱中進行培養(yang) 。

• 觀察貼壁情況：HS5細胞通常在24小時內(nei) 完成貼壁。若HS5細胞未能貼壁，可能是由於(yu) 細胞損傷(shang) 或死亡。

HS5細胞傳代

• 觀察HS5細胞狀態：待HS5細胞生長至80%-90%匯合時進行傳(chuan) 代操作。
  

• 衝(chong) 洗細胞：吸除舊培養(yang) 基，加入2 ml PBS輕輕衝(chong) 洗HS5細胞，去除殘留培養(yang) 基和血清中的雜質。

• 消化HS5細胞：加入1 ml 0.25%胰蛋白酶，輕輕晃動培養(yang) 瓶，確保胰蛋白酶覆蓋HS5細胞表麵。將培養(yang) 瓶放回37°C培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，觀察HS5細胞收縮和變圓。

• 終止消化：當HS5細胞開始脫離瓶壁時，加入3 ml預熱的含FBS的完全培養(yang) 基終止胰蛋白酶的作用。

• 細胞收集：將HS5細胞懸液轉移至15 ml離心管中，以1200 rpm離心3分鍾，棄去上清。

• 重懸與(yu) 接種：用適量完全培養(yang) 基重懸HS5細胞，根據細胞密度需求以1:3至1:5的比例進行接種，並補充完全培養(yang) 基。

HS5細胞凍存

• 收集HS5細胞：按傳(chuan) 代步驟進行HS5細胞的消化和離心收集，將所得HS5細胞沉澱重懸於(yu) 少量完全培養(yang) 基中。
  

• 細胞計數：取少量HS5細胞進行計數，確保凍存細胞的密度為(wei) 1 x 10⁶ 個(ge) /ml。

• 準備凍存液：將HS5細胞重懸於(yu) 預冷凍存液中，混合均勻後立即轉入凍存管中。

• 程序凍存：將裝有HS5細胞的凍存管放入程序凍存盒中，緩慢降溫至-80°C，過夜後轉移至液氮罐中長期保存。