HOB細胞係（人成骨細胞SV40永生化） （暫不提供）

HOB-SV40細胞係是一種通過慢病毒轉染技術引入SV40大T抗原基因，從(cong) 而實現原代人成骨細胞永生化的細胞係。HOB細胞係來源於(yu) 正常人關(guan) 節骨組織的原代成骨細胞，通過基因轉染，SV40大T抗原基因被整合到細胞中，幹擾了細胞周期調控機製，通過與(yu) 關(guan) 鍵的生長抑製基因p53和pRB相互作用，抑製其功能，使細胞獲得了持續增殖的能力。

HOB-SV40永生化細胞係特性特征

• 永生化過程：通過慢病毒轉染技術引入SV40大T抗原基因，SV40大T抗原通過與(yu) 細胞生長抑製基因p53和pRB結合，抑製其功能，使細胞獲得無限增殖能力。

• 細胞形態：HOB-SV40細胞呈長梭狀，具有成纖維細胞樣的形態，適合貼壁生長。

• 生長特性：在適宜的培養(yang) 條件下，HOB-SV40細胞能夠穩定傳(chuan) 代20代以上，表現出良好的增殖能力和生長狀態。

• 基因表達：HOB-SV40細胞係能夠表達多種成骨相關(guan) 基因，包括但不限於(yu) 堿性磷酸酶（ALP）、骨鈣素（OCN）和骨形態發生蛋白（BMP），這些基因在成骨細胞的生物學功能中起著重要作用。

• 細胞周期調控：由於(yu) SV40大T抗原的表達，HOB-SV40細胞在細胞周期調控方麵表現出異常，能夠持續增殖而不受到正常細胞生長抑製機製的限製。

HOB細胞係參數表

HOB人成骨細胞SV40永生化培養教程

HOB細胞複蘇

• 將凍存的HOB細胞在37℃水浴中快速解凍，期間輕輕搖晃凍存管以加速解凍過程，通常1-2分鍾即可。
  

• 解凍後，迅速將HOB細胞懸液轉移至含有4-6ml預熱好的完全培養(yang) 基的離心管中，輕輕混勻。

• 在1000rpm下離心3-5分鍾，棄去上清液。
  

• 加入適量的新鮮完全培養(yang) 基（5-10ml），輕輕重懸HOB細胞，避免產(chan) 生氣泡。

• 將重懸後的HOB細胞轉移至T25培養(yang) 瓶中，補充完全培養(yang) 基至10-12ml。
  

• 將培養(yang) 瓶放入37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中靜置培養(yang) 。

HOB細胞傳代操作

• 當HOB細胞覆蓋培養(yang) 瓶底麵積的80%-90%時，應進行傳(chuan) 代操作。
  

• 去除培養(yang) 基：用移液管吸幹培養(yang) 瓶中的舊培養(yang) 基。
  

• 潤洗HOB細胞：加入3-4ml常溫PBS輕輕潤洗細胞，約10-20秒後吸盡PBS。

• 消化HOB細胞：加入1ml 0.25%胰酶溶液覆蓋HOB細胞層，輕輕晃動培養(yang) 瓶以確保胰酶均勻分布。

• 觀察消化：將培養(yang) 瓶放回培養(yang) 箱中消化1-3分鍾，觀察HOB細胞變圓但未完全脫落時，立即加入2-3ml完全培養(yang) 基終止消化。

• 離心：混勻後以900rpm離心3-5分鍾，棄去上清液。

• 重懸HOB細胞：加入新鮮完全培養(yang) 基輕輕重懸HOB細胞，並按照1:2至1:4的比例分配到新的培養(yang) 瓶中。

• 靜置培養(yang) ：補足完全培養(yang) 基，將培養(yang) 瓶放回培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

HOB細胞培養注意事項

• 消化時間控製：不同品牌的胰酶對HOB細胞的消化時間可能有所不同，建議嚴(yan) 格控製消化時間，以避免HOB細胞受損。

• 操作輕柔：在傳(chuan) 代和重懸HOB細胞時，盡量保持輕柔，避免產(chan) 生氣泡，這有助於(yu) 維持HOB細胞的健康狀態。

• HOB細胞狀態監控：定期檢查HOB細胞的形態和生長狀態，以確保細胞處於(yu) 良好狀態。

• 凍存後的HOB細胞應盡快取出一管進行複蘇，以驗證凍存效果。如果發現HOB細胞存活率較低，應及時調整凍存和複蘇條件。

HOB細胞凍存

• 推薦使用92% FBS + 8% DMSO的凍存液配方。對於(yu) 更有經驗的研究人員，可以使用92%完全培養(yang) 基 + 8% DMSO的配方。
  

• 消化HOB細胞並離心後，加入預先配置好的凍存液重懸HOB細胞。
  

• 將HOB細胞懸液分裝到標記好的凍存管中。

• 將凍存管放入程序降溫盒中，置於(yu) -80℃冰箱過夜，隨後轉移到液氮中長期保存。