原代小鼠顱骨成骨細胞

原代小鼠顱骨成骨細胞（C57BL/6 OB cells）是研究骨生物學的重要模型，通常來源於(yu) C57BL/6或ICR品係乳鼠的顱蓋骨。

成骨細胞在體(ti) 外培養(yang) 中呈現多角形或梭形形態，通過細胞突起相互連接形成網絡，具備分泌骨基質（如Ⅰ型膠原和非膠原蛋白）並誘導礦化形成礦化結節的能力，同時表達堿性磷酸酶（ALP）、骨鈣素（OCN）、RUNX2等成骨標誌物。原代成骨細胞在基礎研究、藥物篩選、生物材料開發及組織工程等領域具有重要價(jia) 值，廣泛用於(yu) 探索骨形成和重建機製，研究骨質疏鬆等疾病的細胞和分子基礎，評估骨再生相關(guan) 藥物及生物材料的效果，是骨科學研究中不可或缺的實驗工具。

原代小鼠顱骨成骨細胞特性特征

• 原代小鼠顱骨成骨細胞在體(ti) 外培養(yang) 時呈現多角形或梭形，細胞間長突起互相接觸，形成網絡狀結構。這種形態有助於(yu) 細胞間的相互作用和信號傳(chuan) 遞。

• 小鼠顱骨成骨細胞表達多種成骨相關(guan) 的生物標誌物，如：堿性磷酸酶（ALP）、RUNX2、骨鈣素（OCN）。

• 礦化能力：在適當誘導下，小鼠顱骨成骨細胞能夠形成礦化結節，顯示出其成骨潛能。通過茜素紅S染色可以觀察到紅色顆粒狀或塊狀鈣結節的形成，這表明細胞具備合成和礦化骨基質的能力。

• 增殖與(yu) 分化能力：原代小鼠顱骨成骨細胞在培養(yang) 中能夠持續增殖，並在適宜條件下分化為(wei) 成熟的成骨細胞。

• 小鼠顱骨成骨細胞在不同階段表達不同的基因：初期階段主要表達ALP、COL1A1（Ⅰ型膠原）等基因；隨著分化進程，RUNX2和OCN等基因的表達逐漸增加。

• 研究還發現，與(yu) 成骨相關(guan) 的信號通路（如Wnt/β-catenin、TGF-β等）在這些細胞中也被激活，促進其分化和功能。

• 成骨細胞通過多種信號通路調控其功能，包括：Wnt/β-catenin信號通路、RANK/RANKL/OPG通路。

• 成骨細胞能夠分泌外泌體(ti) ，這些外泌體(ti) 含有多種生物活性分子，如miRNA、蛋白質等，參與(yu) 調節破骨細胞的分化及其他細胞間的相互作用
  

原代小鼠顱骨成骨細胞參數表

原代小鼠顱骨成骨細胞培養教程

小鼠顱骨成骨細胞的複蘇

• 快速解凍：將凍存管從(cong) 液氮中取出，立即放入37℃水浴中，迅速搖動，直至細胞懸液完全融化（約1-2分鍾）。

• 小心打開凍存管，將內(nei) 容物轉移至離心管，加入10 mL預熱的完全培養(yang) 基。
  

• 1000 rpm離心5分鍾，去除上清液以清除DMSO殘留。

• 用新鮮完全培養(yang) 基重懸細胞沉澱，將細胞轉移至培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 。
  

• 複蘇後24小時內(nei) 更換新鮮培養(yang) 基以清除死細胞和代謝廢物，隨後常規培養(yang) 。

小鼠顱骨成骨細胞的凍存

• 將培養(yang) 至對數生長期的小鼠顱骨成骨細胞用0.25%胰蛋白酶消化，收集細胞懸液。

• 1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液，用PBS清洗後再次離心。

• 製備凍存液：按細胞濃度1×10⁶至1×10⁷個(ge) /mL，用凍存液重懸細胞沉澱。

• 分裝：將細胞懸液分裝至凍存管中，每管1 mL，蓋緊凍存管。

• 逐步降溫：將凍存管放入冷凍盒中，置於(yu) -80℃保存24小時後轉移至液氮罐長期保存。

小鼠顱骨成骨細胞的傳代

• 觀察細胞狀態：當小鼠顱骨成骨細胞貼壁生長並達到80%-90%融合時，準備傳(chuan) 代操作。

• 棄去培養(yang) 基，用PBS輕輕衝(chong) 洗細胞一遍以去除殘留物質。
  

• 加入適量胰蛋白酶，覆蓋細胞層後置於(yu) 37℃孵育30-45秒，觀察細胞變圓並開始脫附。

• 輕拍培養(yang) 瓶側(ce) 壁幫助細胞完全脫附。

• 加入2倍體(ti) 積預熱的完全培養(yang) 基終止消化，並將細胞懸液轉移至離心管。
  

• 1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液，用新鮮培養(yang) 基重懸細胞沉澱。
  

• 按1:2或1:3的比例，將細胞接種至新的培養(yang) 瓶中，加入適量培養(yang) 基，繼續培養(yang) 。

注意事項

• 複蘇階段：盡量縮短細胞暴露在DMSO環境中的時間，避免對細胞造成毒性影響。

• 凍存階段：確保降溫過程緩慢均勻（約1℃/分鍾），以減少細胞損傷(shang) 。

• 傳(chuan) 代階段：控製胰蛋白酶的消化時間，避免過度消化導致細胞活性下降。

• 無菌操作：整個(ge) 實驗過程中嚴(yan) 格無菌，防止汙染影響細胞狀態。