MC3T3-E1 Subclone 24 小鼠胚胎成骨細胞前體(ti) 細胞 （暫不提供）

MC3T3-E1 Subclone 24細胞源自小鼠胚胎、新生小鼠的顱骨組織。是自發永生化的貼壁生長細胞係，屬於(yu) 成骨細胞前體(ti) 細胞，並且在體(ti) 外培養(yang) 條件下，廣泛用於(yu) 成骨細胞分化和礦化過程的研究，尤其在成骨相關(guan) 信號通路研究中具有重要的應用價(jia) 值。是研究成骨細胞分化機製的常用模型。

MC3T3-E1 Subclone 24和MC3T3 Subclone 30是從(cong) 表型異質的MC3T3-E1細胞係中分離出的亞(ya) 克隆。它們(men) 在抗壞血酸培養(yang) 條件下表現出較弱的成骨細胞分化能力，未能形成細胞外基質（ECM）。相比之下，MC3T3-E1 Subclone 4和MC3T3 Subclone 14細胞係在抗壞血酸和3-4 mM無機磷酸鹽的共同作用下，能夠有效地進行成骨細胞分化，並在10天內(nei) 形成礦化良好的ECM。因此，Subclone 24和30常作為(wei) Subclone 4和14的陰性對照。

MC3T3-E1 Subclone 24小鼠胚胎成骨細胞特性特征

• 基因表達：MC3T3-E1 Subclone 24在抗壞血酸的培養(yang) 基中生長時，表現出較差的成骨細胞分化能力，未能形成礦化良好的細胞外基質（ECM）。與(yu) 高分化亞(ya) 克隆（如Subclone 4和Subclone 14）相比，其成骨標誌物如骨唾液蛋白（BSP）、骨鈣素（OCN）及甲狀旁腺激素相關(guan) 蛋白（PTHrP）受體(ti) 的mRNA表達水平較低。

• 膠原蛋白表達：盡管在成骨分化方麵表現較差，但MC3T3-E1 Subclone 24和其他亞(ya) 克隆在培養(yang) 物中產(chan) 生相似量的膠原蛋白，並表達編碼成骨細胞相關(guan) 轉錄因子Osf2/Cbfa1的mRNA的基礎水平相當。

• 研究模型：MC3T3-E1 Subclone 24可作為(wei) 成骨細胞分化機製的研究模型，特別適用於(yu) 對比分析不同亞(ya) 克隆在成骨標記基因表達及細胞外基質形成等方麵的差異。

• 致瘤性：在免疫缺陷小鼠體(ti) 內(nei) 植入後，低分化的亞(ya) 克隆僅(jin) 能產(chan) 生纖維組織，而高分化的亞(ya) 克隆則能夠形成類似編織骨的骨樣結構。

MC3T3-E1 Subclone 24細胞參數表

MC3T3-E1 Subclone 24小鼠胚胎成骨細胞前體細胞培養教程

細胞培養步驟

• 將MC3T3-E1細胞從(cong) 凍存狀態解凍後，迅速轉移至含有新鮮培養(yang) 基的無菌培養(yang) 瓶中，確保細胞的活力。
  

• 接種密度建議為(wei) 1-2 x 10^4細胞/cm²，以確保MC3T3-E1細胞的良好生長。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO2的培養(yang) 箱中，提供適宜的生長環境。
  

• 每2-3天更換一次培養(yang) 基，確保MC3T3-E1細胞能夠持續獲得營養(yang) 並排除代謝廢物。

細胞傳代

• 當MC3T3-E1細胞的匯合度達到90%時，開始傳(chuan) 代操作。
  

• 準備新鮮的培養(yang) 基和胰酶溶液，以確保MC3T3-E1細胞的傳(chuan) 代成功。

• 去除舊的培養(yang) 基，用Hanks液輕輕洗滌MC3T3-E1細胞，以去除殘留的培養(yang) 基。
  

• 加入1-2 mL胰酶，輕輕搖動培養(yang) 瓶，使胰酶均勻接觸MC3T3-E1細胞。

• 在37℃孵育1-3分鍾，直到MC3T3-E1細胞變圓且開始脫落。

• 加入新鮮培養(yang) 基中和胰酶作用，收集細胞，使用細胞計數板計數MC3T3-E1細胞。

• 離心細胞（1000 rpm，5分鍾），去除上清液。

• 根據需要以1:2到1:4的比例將MC3T3-E1細胞重新接種到新的培養(yang) 瓶中。

細胞凍存

• 選擇對數生長期的健康MC3T3-E1細胞進行凍存。
  

• 準備凍存液，配方為(wei) ：55%培養(yang) 基、40%胎牛血清（FBS）、5%DMSO，用於(yu) MC3T3-E1細胞的凍存。

• 計數MC3T3-E1細胞並根據需要計算凍存液的體(ti) 積。
  

• 將MC3T3-E1細胞重懸於(yu) 凍存液中，分裝至無菌凍存管中，標記細胞類型和日期。

• 使用控製速率冷凍設備，按照每分鍾降低約1℃的速度冷凍MC3T3-E1細胞；或放置在-80℃冰箱中過夜。

• 凍存後，將MC3T3-E1細胞的凍存管轉移至液氮中進行長期保存。

細胞複蘇

• 從(cong) 液氮中取出MC3T3-E1細胞凍存管，立即置於(yu) 37℃水浴中，輕輕搖動以快速解凍。
  

• 解凍後，迅速將MC3T3-E1細胞轉移至含有新鮮培養(yang) 基的無菌試管中，輕輕混勻。
  

• 離心MC3T3-E1細胞（1000 rpm，5分鍾），去除上清液。

• 將MC3T3-E1細胞重懸於(yu) 新鮮培養(yang) 基中，並接種至培養(yang) 瓶中。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO2培養(yang) 箱中，觀察MC3T3-E1細胞的複蘇和生長情況。

注意事項

• 操作全程保持無菌狀態，避免MC3T3-E1細胞汙染。

• 定期觀察MC3T3-E1細胞的形態和生長狀態，確保其健康。

• 凍存時使用適當的保護劑（如DMSO），並注意操作安全，確保MC3T3-E1細胞的存活率。