K7M2-WT細胞（小鼠骨肉瘤成骨細胞）

K7M2-WT細胞係於(yu) 1998年從(cong) 患有骨肉瘤的小鼠的骨組織中分離，K7M2-WT細胞係是通過將K7小鼠骨肉瘤細胞係注射至BALB/c小鼠的脛骨近端獲得的，是一種有效的骨肉瘤模型細胞係。

K7M2-WT細胞特性特征

• 致瘤性：在BALB/c小鼠中形成腫瘤，90%以上接種的小鼠會(hui) 自發轉移至肺部

• 轉移性： K7M2-WT細胞具備高肺轉移潛能

• 抗原表達：CD31陽性

• 基因表達：分泌性磷蛋白1（骨橋蛋白，osteopontin）、凝血因子VIII、整合素結合唾液蛋白（BSP）、Biglyan、Decorin、Villin 2（ezrin）；

• 蛋白表達：骨唾液酸蛋白、Biglyan、Decorin、骨橋蛋白

• 這些基因和蛋白的表達特征表明K7M2 wt細胞屬於(yu) 骨譜係細胞。

• 功能特征：作為(wei) 骨肉瘤研究的理想模型，特別是用於(yu) 研究腫瘤轉移機製、可作為(wei) 轉染宿主細胞

K7M2-WT細胞參數表

K7M2-WT小鼠骨肉瘤成骨細胞培養教程

K7M2-WT細胞複蘇

• 從(cong) 液氮中取出凍存的K7M2-WT細胞，迅速放入37°C水浴中解凍，輕輕搖動至完全融化。

• 用75%酒精擦拭凍存管表麵，移入無菌操作台。

• 將K7M2-WT細胞懸液轉移至15 ml離心管中，加入5 ml預熱的完全培養(yang) 基。

• 以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液。

• 加入新鮮的完全培養(yang) 基重懸K7M2-WT細胞，轉移至培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37°C、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 。

K7M2-WT細胞培養

• 每日觀察K7M2-WT細胞生長情況，換液頻率為(wei) 2-3天一次，具體(ti) 視K7M2-WT細胞密度而定。

• 當K7M2-WT細胞匯合度達70-80%時，可以進行傳(chuan) 代。

K7M2-WT細胞傳代

• 吸去培養(yang) 瓶中的舊培養(yang) 基，用PBS緩衝(chong) 液洗滌K7M2-WT細胞1-2次。

• 加入適量胰蛋白酶-EDTA溶液，置於(yu) 37°C培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，直至K7M2-WT細胞開始脫落。

• 輕輕敲打培養(yang) 瓶底部，確保K7M2-WT細胞完全脫落。

• 加入新鮮的完全培養(yang) 基終止消化，輕輕吹打混勻K7M2-WT細胞懸液。

• 將K7M2-WT細胞懸液轉移至15 ml離心管中，以1000 rpm離心5分鍾。

• 棄去上清液，加入適量新鮮培養(yang) 基重懸K7M2-WT細胞。

• 按1:2至1:6的比例進行傳(chuan) 代，將K7M2-WT細胞懸液分裝至新的培養(yang) 瓶中，置於(yu) 培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

K7M2-WT細胞凍存

• 當K7M2-WT細胞匯合度達80-90%時，進行細胞凍存。

• 按上述傳(chuan) 代步驟收集K7M2-WT細胞，並用PBS洗滌。

• 以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液。

• 加入凍存液重懸K7M2-WT細胞，細胞密度控製在1x10⁶-1x10⁷ cells/ml。

• 將K7M2-WT細胞懸液分裝至凍存管中，每管1 ml。

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，以-1°C/min降溫至-80°C，24小時後轉移至液氮中長期保存。

注意事項

• 使用高品質胎牛血清，推薦HAKATA優(you) 等胎牛血清，以確保K7M2-WT細胞獲得最佳營養(yang) 和生長因子。

• 使用新鮮的DMEM高糖培養(yang) 基，減少培養(yang) 基老化對K7M2-WT細胞的影響。

• 維持穩定的培養(yang) 環境，避免頻繁開關(guan) 培養(yang) 箱門，減少溫度和CO₂濃度的波動對K7M2-WT細胞的影響。

• 細胞傳(chuan) 代時，胰蛋白酶消化時間不宜過長，以免損傷(shang) K7M2-WT細胞。

降低K7M2-WT細胞對外界刺激敏感性的方法：

• 使用新鮮的DMEM高糖培養(yang) 基，確保K7M2-WT細胞獲得最佳的營養(yang) 供應。

• 使用高質量的胎牛血清，如HAKATA優(you) 等胎牛血清，提供穩定的生長因子和營養(yang) 成分。

• 使用優(you) 化的完全培養(yang) 基，減少額外添加成分帶來的刺激。

• 保持穩定的培養(yang) 環境，包括溫度、CO₂濃度和濕度，避免頻繁改變培養(yang) 條件對K7M2-WT細胞的影響。

• 實驗操作時減少對K7M2-WT細胞的機械刺激，如過度吹打或劇烈震動。