MNNG/HOS Cl #5 [R-1059-D]細胞（人骨肉瘤細胞）

MNNG/HOS Cl#5[R-1059-D]是一種人骨肉瘤細胞係，源自一名13歲白人女性患者的骨肉瘤組織。
MNNG/HOS Cl#5細胞係是通過使用0.01 mcg/ml的MNNG（N-甲基-N'-硝基-N-亞(ya) 硝基胍）處理原始HOS細胞而得到的，MNNG是一種已知的致癌亞(ya) 硝胺，能夠誘導細胞轉化。

MNNG/HOS Cl #5細胞特性特征

• 由HOS細胞經0.01 mcg/ml MNNG（N-甲基-N'-硝基-N-亞(ya) 硝基胍，一種致癌亞(ya) 硝胺）轉化而來
  

• 生長特性：貼壁生長、表現出高飽和密度

• mnnghos細胞在軟瓊脂中具有高平板效率（克隆形成率高）

• 致瘤性：mnnghos細胞在裸鼠中具有強烈的致瘤性，皮下接種107個(ge) 細胞後，21天內(nei) 以100%的頻率（5/5）形成腫瘤

• 分子特征：同工酶：G6PD（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶）為(wei) B型

• 由於(yu) MNNG處理，可能存在額外的DNA損傷(shang) 或突變

• 研究表明，從(cong) MNNG/HOS細胞中分離的細胞外囊泡(EVs)可以影響成骨細胞的生成。這些EVs能降低細胞周期和促成骨細胞基因的表達，同時增加促破骨細胞/炎性細胞因子（如RankL、Il1b、Il6和Lcn2）和促腫瘤細胞因子（如CCL2）的表達
  

MNNG/HOS Cl #5細胞參數表

MNNG/HOS Cl #5人骨肉瘤細胞培養教程

MNNGHOS細胞複蘇步驟

• 從(cong) 液氮中取出凍存管，迅速置於(yu) 37°C水浴中，輕輕搖動至完全融化。

• 將MNNGHOS細胞懸液轉移到含有預熱培養(yang) 基的離心管中。

• 以1000 rpm 離心5分鍾，棄去上清。

• 用新鮮培養(yang) 基重懸MNNGHOS細胞，並轉移到培養(yang) 瓶中。

常規培養

• 使用T25培養(yang) 瓶，接種密度為(wei) 1×10^6 cells/瓶。

• 每2-3天更換一次培養(yang) 基。

• 觀察MNNGHOS細胞生長狀態，保持細胞在對數生長期。

傳代步驟

• 當MNNGHOS細胞匯合度達到80-90%時進行傳(chuan) 代。

• 用PBS輕輕洗滌細胞層。

• 加入適量胰蛋白酶-EDTA溶液，37°C孵育2-3分鍾。

• 輕輕拍打培養(yang) 瓶，觀察細胞脫落。

• 加入含血清的培養(yang) 基終止消化。

• 以1000 rpm 離心5分鍾，棄去上清。

• 用新鮮培養(yang) 基重懸MNNGHOS細胞，按1:3或1:4的比例傳(chuan) 代。

細胞凍存步驟

• 收集對數生長期的MNNGHOS細胞。

• 配製凍存液（90% FBS + 10% DMSO）。

• 調整MNNGHOS細胞濃度至1-2×10^6 cells/ml。

• 將MNNGHOS細胞懸液分裝到凍存管中。

• 使用程序降溫盒，置於(yu) -80°C過夜。

• 轉移到液氮中長期保存。

注意事項

• 定期檢查: 定期觀察MNNGHOS細胞形態和生長狀態。

• 無菌操作: 保持無菌操作，預防汙染。

• STR鑒定: 定期進行STR鑒定，確保MNNGHOS細胞係純度和一致性。

• 生物安全: 由於(yu) 這是一種轉化的腫瘤細胞係，處理時需遵守相關(guan) 的生物安全規程。

常見問題與解決方法

常見錯誤

• 培養(yang) 基錯誤: 未使用推薦的MEM + 10% FBS + 1% P/S。

• 接種密度不當: 未按照建議的1×10^6 cells/T25培養(yang) 瓶密度接種。

• 傳(chuan) 代時機錯誤: 未在MNNGHOS細胞達到80-90%匯合度時進行傳(chuan) 代。

• 消化時間過長: 胰蛋白酶處理時間過長，導致細胞損傷(shang) 。

• 不適宜培養(yang) 條件: 未保持37°C，5% CO2的標準培養(yang) 條件。

• 汙染問題: 由於(yu) 操作不當導致MNNGHOS細胞培養(yang) 物被細菌或真菌汙染。

保障MNNGHOS細胞活性的方法

• 正確使用培養(yang) 基: 嚴(yan) 格使用推薦的MEM + 10% FBS + 1% P/S。

• 適當接種密度: 遵循1×10^6 cells/T25培養(yang) 瓶的推薦密度。

• 定期觀察細胞形態: 每天檢查MNNGHOS細胞的生長狀態和形態，確保保持上皮細胞樣特征。

• 及時傳(chuan) 代: 在MNNGHOS細胞達到80-90%匯合度時傳(chuan) 代，避免過度生長。

• 控製消化時間: 傳(chuan) 代過程中密切觀察細胞脫落，避免過度消化。

• 維持穩定的培養(yang) 條件: 確保培養(yang) 箱溫度、CO2濃度和濕度穩定。

• 定期活性檢測: 使用MTT或CCK-8等細胞活性檢測試劑評估MNNGHOS細胞活力。

• 減少凍融次數: 盡量減少MNNGHOS細胞凍存和複蘇次數，每次複蘇後進行1-2次傳(chuan) 代再用於(yu) 實驗。

• 定期STR鑒定: 確保MNNGHOS細胞係的純度和一致性。

• 嚴(yan) 格無菌操作: 預防汙染，確保實驗環境的無菌。