nb4細胞係 (人急性早幼粒細胞白血病細胞)

NB4細胞係來源於(yu) 一位23歲急性早幼粒細胞白血病（APL）女性患者的骨髓，於(yu) 1989年在她第二次複發時建立。

nb4細胞係具有APL的特征性染色體(ti) 易位t(15;17)，導致PML-RARα融合基因的形成，這是APL的分子標誌。

NB4細胞是懸浮生長的細胞係，呈淋巴母細胞樣形態。細胞的具體(ti) 形態特征包括胞漿較少，核質比大，細胞核較規則，核仁不明顯。電子顯微鏡觀察顯示，NB4細胞含有少量顆粒，核質比例介於(yu) 成熟早幼粒細胞（M3）和胚胎幹細胞（ES）之間。

nb4細胞係特性、分子特征、基因表達等

• nb4細胞攜帶特征性染色體(ti) 易位t(15;17)，導致PML-RARα融合基因的形成、PML-RARα融合蛋白是APL的分子標誌，在NB4細胞中表達

• 表現出較弱的髓過氧化物酶（MPO）活性，細胞質中含有少量MPO顆粒
  

• 與(yu) 胚胎幹細胞（ES）相比，在多個(ge) 與(yu) 蛋白質和核酸組分相關(guan) 的拉曼光譜峰值上表現出更高的強度

• nb4細胞可能表達一些典型的早幼粒細胞表麵標記，如CD13、CD33等
  

• 在特定條件下，如暴露於(yu) 視黃酸（ATRA）或三氧化二砷（ATO）等分化誘導劑時，nb4細胞可以發生分化
  

• 對某些化療藥物或分化誘導劑敏感，可誘導細胞凋亡或程序性細胞死亡
  

• 在與(yu) 臍帶間充質幹細胞（UC-MSCs）共培養(yang) 後，NB4細胞的基因表達譜發生顯著變化
  

• 活化的通路包括白細胞跨內(nei) 皮遷移、腫瘤轉錄失調、細胞黏附分子（CAMs）、Fc-γ受體(ti) 介導的吞噬作用和肌動蛋白骨架的調節

• 藥物敏感性：對齊墩果酸等化合物敏感，可誘導細胞凋亡

• 生長特性：懸浮生長，倍增時間約35-45小時

nb4細胞係參數表

nb4人急性早幼粒細胞白血病細胞係培養教程

NB4細胞複蘇

• 從(cong) 液氮中取出凍存的NB4細胞，在37°C水浴中快速解凍。

• 緩慢滴加預溫的完全培養(yang) 基稀釋NB4細胞懸液。

• 離心洗滌1-2次以去除DMSO。

• 將NB4細胞重懸於(yu) 新鮮完全培養(yang) 基中。

日常培養

• 換液頻率：每2-3天更換培養(yang) 基。

• NB4細胞密度：保持在2-8 × 10^5 cells/mL之間。

NB4細胞傳代方法

• 當NB4細胞密度達到80%-90%時進行傳(chuan) 代。

• 傳(chuan) 代比例為(wei) 1:2到1:4。

• 收集NB4細胞，200-300g離心5分鍾。

• 棄上清，用新鮮完全培養(yang) 基重懸NB4細胞。

NB4細胞凍存

• 凍存液配方：55%基礎培養(yang) 基 + 40% FBS + 5% DMSO

• NB4細胞密度：1-5 × 10^6 cells/mL

• 降溫速率：-1°C/分鍾

• 保存條件：最終保存於(yu) 液氮中（-196°C）

注意事項

• 無菌操作：確保操作環境無菌，避免NB4細胞汙染。

• 定期檢查：觀察NB4細胞形態和生長狀況，定期進行支原體(ti) 檢測。

• 代數控製：建議使用10代以內(nei) 的NB4細胞。

• 培養(yang) 基溶解：使用溫水溶解培養(yang) 基粉末，以確保完全溶解。

• 質量控製：定期進行STR鑒定，確保NB4細胞係一致性。

特殊應用

• 分化誘導：使用ATRA（1μM）或ATO（0.1-0.5μM）誘導NB4細胞分化。

• 藥物敏感性實驗：可使用齊墩果酸等化合物進行NB4細胞實驗。

常見問題及解決方案

• NB4細胞生長速度變慢或停滯：檢查培養(yang) 基新鮮度、細胞密度和培養(yang) 條件。

• NB4細胞形態異常：確保傳(chuan) 代操作規範，避免機械損傷(shang) 。

• 培養(yang) 基pH值改變：定期更換培養(yang) 基，避免代謝產(chan) 物積累。

• NB4細胞活力下降：優(you) 化複蘇和傳(chuan) 代操作，使用新鮮培養(yang) 基。

避免NB4細胞凋亡的方法

• 優(you) 化培養(yang) 條件：確保37°C，95%空氣 + 5%二氧化碳的穩定環境。

• 定期換液：每2-3天換液，避免代謝廢物積累。

• 控製NB4細胞密度：保持在2-8 × 10^5 cells/mL之間。

• 避免機械損傷(shang) ：輕柔操作，避免過度吹打細胞懸液。

• 傳(chuan) 代比例：根據NB4細胞生長情況調整，通常為(wei) 1:2到1:4。

• 添加抗凋亡因子：如Bcl-2家族蛋白。

• 避免汙染：使用無菌技術操作，定期進行支原體(ti) 檢測。