PT67細胞（小鼠逆轉錄病毒包裝株）

PT-67小鼠逆轉錄病毒包裝株是從(cong) TK-NIH/3T3細胞中衍生出的細胞係，專(zhuan) 門用於(yu) 產(chan) 生複製缺陷的逆轉錄病毒載體(ti) 。PT-67細胞係的起源可追溯至NIH 3T3細胞係。NIH 3T3細胞由George Todaro和Howard Green於(yu) 1962年從(cong) NIH瑞士小鼠（NIH Swiss mice）的胚胎成纖維細胞中。PT67細胞通過原代培養(yang) ，經每三天傳(chuan) 代一次、接種約3×10^5個(ge) 細胞，逐漸獲得了能夠持續增殖的永生化特性，最終形成了NIH 3T3這一經典的成纖維細胞係。

NIH 3T3細胞的生物學特征包括貼壁生長和接觸抑製，形態上呈現紡錘形態。由於(yu) 其在基因轉染和細胞轉化實驗中的高效能，NIH 3T3被廣泛用於(yu) 生物醫學研究領域。而PT-67則是在此基礎上通過基因改造專(zhuan) 門設計用於(yu) 生產(chan) 逆轉錄病毒顆粒，廣泛應用於(yu) 基因治療、疫苗開發等方麵。

PT67細胞特性特征

• 病毒顆粒生產(chan) ：PT67細胞能夠產(chan) 生複製缺陷的逆轉錄病毒載體(ti) 顆粒，這些顆粒能夠結合靶細胞上的長臂猿白血病病毒受體(ti) Glvr-1（Pit-1）或雙嗜性逆轉錄病毒受體(ti) Ram-1（Pit-2）進行有效的基因轉導。

• 基因表達：PT67細胞係經過基因改造，具備高效的外源基因包裝能力，適用於(yu) 基因治療和疫苗研發。

• PT-67小鼠逆轉錄病毒包裝株廣泛應用於(yu) 基因傳(chuan) 遞、疫苗開發及其他生物醫學研究領域。由於(yu) 其能夠高效產(chan) 生逆轉錄病毒載體(ti) ，成為(wei) 研究病毒學和基因工程的重要工具
  

PT67小鼠逆轉錄病毒包裝株參數表

PT67小鼠逆轉錄病毒包裝株培養教程

PT67細胞複蘇

• 迅速將含有PT67細胞的凍存管置於(yu) 37℃水浴中解凍，約1-2分鍾，直至細胞懸液完全解凍。
  

• 將解凍的PT67細胞轉移至含有4-6 mL完全培養(yang) 基的離心管中，輕輕混勻以減少細胞損傷(shang) 。

• 在1000 RPM下離心3-5分鍾，棄去上清液。
  

• 加入適量的完全培養(yang) 基（約1-2 mL）重懸PT67細胞。

• 將重懸後的PT67細胞移入T25培養(yang) 瓶中，加入6-8 mL完全培養(yang) 基。
  

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃的培養(yang) 箱中過夜培養(yang) ，並在次日顯微鏡下檢查PT67細胞的貼壁情況及生長狀態。

PT67細胞傳代

• 當PT67細胞的密度達到80%-90%時，可進行傳(chuan) 代。細胞過密可能會(hui) 導致生長抑製，因此應在適當密度下進行傳(chuan) 代。
  

• 棄去培養(yang) 瓶中的舊培養(yang) 基，用預溫的無鈣鎂PBS輕輕衝(chong) 洗PT67細胞1-2次。
  

• 加入1 mL的胰蛋白酶-EDTA消化液（0.25%胰蛋白酶，0.53 mM EDTA），在37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾。

• 觀察PT67細胞的形態，當大部分細胞變圓且鬆散時，輕輕敲擊培養(yang) 瓶底部以促進細胞脫落。加入含有10% FBS的培養(yang) 基終止消化。

• 將消化後的PT67細胞懸液轉移至離心管中，1000 RPM離心3-5分鍾，棄去上清液。
  

• 重新加入適量的完全培養(yang) 基重懸PT67細胞，並按1:2比例進行傳(chuan) 代，移入新的T25培養(yang) 瓶，繼續培養(yang) 。

PT67細胞凍存

• 當PT67細胞生長狀態良好且密度適中時，可進行凍存。凍存液的配方為(wei) 90%完全培養(yang) 基和10% DMSO。
  

• 將傳(chuan) 代後的PT67細胞離心收集，棄去上清液，並用凍存液重懸細胞。
  

• 將PT67細胞懸液分裝到凍存管中，每管約1 mL細胞懸液。

• 將凍存管置於(yu) -80℃冰箱中過夜預凍，次日轉移至液氮罐中長期保存。