HEK293T/17人胚腎細胞

HEK293T/17細胞係是293T細胞係的衍生株，293T細胞係本身是通過在HEK293細胞中引入SV40大T抗原基因而獲得的高效轉染細胞株。HEK293細胞最初由荷蘭(lan) 生物學家Alex van der Eb於(yu) 1973年從(cong) 合法墮胎的健康女性胎兒(er) 的胚胎腎細胞中提取，並通過轉化腺病毒DNA片段建立。

293T/17細胞係則是在293T細胞（293tsA1609neo）的基礎上通過克隆和篩選獲得，具有高效生成逆轉錄病毒的能力，廣泛應用於(yu) 基因工程和病毒學研究。

HEK293T/17人胚腎細胞特性特征

• HEK293T/17細胞持續表達猿病毒40（SV40）大T抗原，具備高效的轉染能力，能夠支持外源基因的複製和表達。

• 逆轉錄病毒生成：293T/17細胞能夠生成高滴度的感染性逆轉錄病毒，適合用於(yu) 病毒載體(ti) 的生產(chan) 和研究.

• 貼壁能力：293T/17細胞雖然是貼壁細胞，但其貼壁能力較弱，需要在培養(yang) 時特別注意

HEK293T/17人胚腎細胞參數表

HEK293T/17人胚腎細胞培養教程

細胞複蘇

• 解凍：將含有1 mL HEK293T/17細胞懸液的凍存管放置於(yu) 37℃水浴中，迅速搖晃解凍。

• 混合：解凍後，立即將HEK293T/17細胞懸液加入4 mL預熱的完全培養(yang) 基中，輕輕混合均勻。

• 離心：以1000 rpm離心5分鍾，去除上清。

• 重懸：用新鮮的完全培養(yang) 基重懸HEK293T/17細胞，並將其轉移至T25培養(yang) 瓶中。

培養條件

• 培養(yang) 基：使用DMEM培養(yang) 基，補充10%胎牛血清（FBS）、1% L-穀氨酰胺（2mM）、1%非必需氨基酸（NEAA）和1%雙抗（抗生素-抗真菌素混合）。

• 培養(yang) 環境：37℃，5% CO2。

• 貼壁能力：HEK293T/17細胞的貼壁能力較弱，建議使用預鋪0.2%明膠的培養(yang) 瓶或培養(yang) 皿，以增強細胞附著。

傳代

• 傳(chuan) 代比例：HEK293T/17細胞密度達到70%-90%時進行傳(chuan) 代，比例為(wei) 1:3至1:5。

• 消化：使用0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA消化HEK293T/17細胞。

• 傳(chuan) 代頻率：每周換液2-3次，保持HEK293T/17細胞的健康生長。

凍存

• 凍存液：使用95%完全培養(yang) 基和5% DMSO的混合液。

• 凍存步驟：將HEK293T/17細胞以適當密度收集後，加入凍存液，分裝入凍存管中。將細胞管逐步降溫至-80℃，然後轉入液氮中進行長期保存。

注意事項

• 細胞健康監測：定期觀察HEK293T/17細胞的形態和生長狀態，確保無汙染，並及時處理異常情況。

• 細胞複蘇後：HEK293T/17細胞複蘇後第一次傳(chuan) 代建議采用T25培養(yang) 瓶的1:2傳(chuan) 代比例，以促進細胞恢複和增殖。

• 貼壁能力：HEK293T/17細胞的貼壁能力較差，可能導致細胞在培養(yang) 中脫落。為(wei) 改善此問題，推薦使用預鋪0.2%明膠的培養(yang) 瓶或培養(yang) 皿。

• 細胞過密生長：避免HEK293T/17細胞過密生長，這可能導致細胞脫落和死亡。需定期檢查細胞密度，並在達到適當密度時進行傳(chuan) 代。

• 複蘇後細胞狀態：解凍過程需迅速且均勻，以減少對HEK293T/17細胞的損傷(shang) ，從(cong) 而保持細胞的活力。

• 冷凍保存問題：長時間保存可能降低HEK293T/17細胞的存活率。建議在對數生長期內(nei) 進行冷凍，並盡量縮短冷凍保存時間。

• 增殖速度變化：由於(yu) SV40大T抗原的表達，HEK293T/17細胞的增殖速度較快，但可能影響基因組穩定性。在進行基因編輯實驗時需特別注意多基因型克隆現象。