293t細胞（hek-293t人胚腎細胞）

293T細胞源自人胚腎組織，在HEK-293細胞中插入SV40大T抗原基因後，獲得了高轉染效率的特性。

293T細胞最初名為(wei) 293tsA1609neo，是在293 [HEK-293]細胞株基礎上衍生而來的，通過插入SV40 T-antigen的溫度敏感基因而形成，能夠有效地複製攜帶SV40複製區的載體(ti) ，並且在用於(yu) 生產(chan) 逆轉錄病毒時能夠產(chan) 生高滴度的病毒。

293T細胞由於(yu) 其優(you) 異的性能，HEK-293T細胞已經成為(wei) 基因表達、蛋白質生產(chan) 和逆轉錄病毒生產(chan) 等領域的首選細胞。

hek-293t人胚腎細胞特性

• 293T細胞最初稱為(wei) 293tsA1609neo，是293 [HEK-293]細胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉衍生株。

• hek-293t細胞能夠複製攜帶SV40複製區的載體(ti) ，用於(yu) 生產(chan) 逆轉錄病毒時，會(hui) 產(chan) 生高滴度病毒。

• 293T細胞已廣泛用於(yu) 逆轉錄病毒生產(chan) 、基因表達和蛋白質生產(chan) 。

• 293T細胞是高轉染效率的衍生株，能夠驅動外源基因的高效表達。

• hek-293t細胞係源自人胚腎組織，經過SV40大T抗原基因的插入，形成高轉染效率的衍生株。

• 293T細胞在研究中廣泛應用，特別適用於(yu) 基因表達、蛋白質生產(chan) 和逆轉錄病毒生產(chan) 。

293t細胞參數表

hek-293t人胚腎細胞培養

細胞特性

• 貼壁性較差: 對貼壁因子有要求，最好進行包被處理；也可以提高血清比例來嚐試。注意板材的親(qin) 水性，細胞貼壁鬆散，可隻用EDTA消化，不要用胰蛋白酶過度消化。

• 增殖迅速: 倍增時間約為(wei) 20小時，細胞增殖非常快，通常倍增時間不到一天，隔天即可長滿。融合率不可過高，需要及時傳(chuan) 代。

• 容易聚團: 消化下來的細胞容易成團，要吹打吹散。

細胞培養要點

• 貼壁性較差: 細胞容易飄起來，37℃靜置可重新貼壁。換液時注意不要用力搖晃培養(yang) 瓶。

• 容易消化: 消化下來的細胞容易成團，要吹打吹散。否則傳(chuan) 代後細胞會(hui) 成團生長，不均勻，影響實驗結果。

• 傳(chuan) 代時機: 當細胞生長至匯合率達到80~90%時需要對細胞進行傳(chuan) 代操作，以擴大細胞數量，維持細胞良好的生長狀態。

• 凍存: 隨著傳(chuan) 代次數增加，293T細胞會(hui) 出現生長狀態下降，出現突變等情況。所以要在細胞購進時就進行大量凍存，以保證實驗的穩定性和持續性。

細胞冷凍操作

• 預熱水浴鍋至37℃。

• 快速融化: 將細胞從(cong) 液氮中取出，立即放入水浴鍋中快速搖晃凍存管，使其在1分鍾內(nei) 融化。

• 轉移與(yu) 離心: 用酒精擦拭凍存管，轉移融化的細胞懸液到預先加好完全培養(yang) 基的離心管中，離心1000rpm， 3-5分鍾。

• 重懸與(yu) 接種: 去上清，加入完全培養(yang) 基重懸，接種到T25培養(yang) 瓶中，放入37℃培養(yang) 箱培養(yang) 。

細胞傳代傳代步驟

• 吸出培養(yang) 皿中的培養(yang) 基。

• 加入1×PBS 2ml，輕輕旋轉培養(yang) 皿以清洗細胞，吸出棄去1×PBS。

• 加入胰蛋白酶0.5ml，靜置3-5分鍾。

• 靜置期間，在倒置鏡下觀察細胞是否變圓，相互之間不再連接成片。

• 加入2倍體(ti) 積的完全培養(yang) 基，吹打，製成細胞懸液。

• 將細胞懸液轉移到離心管中，1000 rpm，離心5分鍾。

• 棄去消化液，輕敲離心管底，使細胞初步重懸。

• 加入1.5ml完全培養(yang) 基，吹打混勻細胞。

• 將細胞懸液按比例分配到新的培養(yang) 皿中。

• 將培養(yang) 皿置於(yu) 二氧化碳培養(yang) 箱中培養(yang) 。

注意事項

• 293T細胞貼壁性較差，傳(chuan) 代時不要用力搖晃培養(yang) 瓶。

• 換液時需預熱培養(yang) 基，用PBS清洗細胞時不要對著細胞吹打。

• 吹打細胞時動作盡量輕柔，不要吹出氣泡。

• 細胞貼壁不牢時，盡量在室溫消化10-30秒，也可以適當降低到0.05%的胰酶濃度進行消化。

• 選擇合適的血清，避免批次間的差異對細胞造成影響。

• 及時凍存，保持實驗的穩定性和持續性。