貨號：STM-CL-5024 規格：1×10⁶cells/T25培養(yang) 瓶或1mL凍存管

293A細胞（人胚胎腎細胞係）

來源：人胚胎腎髒纖維母細胞；293A細胞是從(cong) 293細胞係列中分離出的一個(ge) 亞(ya) 克隆株
細胞特征：貼壁細胞，上皮細胞樣
培養(yang) 基：生長培養(yang) 基：DMEM＋10% FBS＋1% P/S
其他：含有穩定整合的E1基因拷貝，提供E1a和E1b蛋白。

Tags： 293A細胞 293A 人胚腎細胞

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價(jia) 格：￥ 1,300.00

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293A細胞來源於(yu) 人胚胎腎髒纖維母細胞，293A細胞是從(cong) 293細胞係列中分離出的一個(ge) 亞(ya) 克隆，具有相對扁平的形態和良好的貼壁能力而得名（A代表adhesion）。293A細胞含有一個(ge) 穩定整合的E1基因拷貝，能夠提供生成重組腺病毒所需的E1蛋白（包括E1a和E1b），常用於(yu) 腺病毒的初始生產(chan) 、擴增和滴定。

在培養(yang) 過程中，293A細胞呈現單層的扁平形態，沒有明顯的細胞重疊和細胞空隙（hole），這使得病毒滴定和空斑測定（plaque assay）更為(wei) 容易。293A細胞的平坦形態使得滴定程序更簡單，且細胞貼壁鬆散，操作時需輕柔處理。

293A細胞表達腺病毒E1區編碼的基因，在反式激活某些病毒啟動子中發揮關(guan) 鍵作用，能夠產(chan) 生異常高水平的蛋白質，並補充E1缺失的重組腺病毒載體(ti) ，促進病毒在研究應用中的複製。

293A細胞可表達異常的玻連蛋白的細胞表麵受體(ti) ，由整合素β1亞(ya) 單位和玻連蛋白受體(ti) α-v亞(ya) 單位組成。

293A人胚胎腎細胞特性

293A細胞來源於(yu) 人胚胎腎髒纖維母細胞。
293A細胞是293細胞係列的一個(ge) 亞(ya) 克隆。
形態相對平坦，具有良好的貼壁能力。
含有穩定整合的E1基因拷貝，提供E1a和E1b蛋白。
常用於(yu) 腺病毒的初始生產(chan) 、擴增和滴定。
單層扁平形態，無明顯的細胞重疊和細胞空隙。
有助於(yu) 病毒滴定和空斑測定（plaque assay）。
可表達異常的玻連蛋白的細胞表麵受體(ti) ，由整合素β1亞(ya) 單位和玻連蛋白受體(ti) α-v亞(ya) 單位組成。

293A細胞參數表

細胞名稱	293A細胞係 (人胚腎細胞)
細胞別稱	HEK293-A; HEK-293A; HEK293A; HEK 293A; 293A; QBI-HEK 293A; QBI-293A
種屬	人
組織來源	人胚胎腎髒纖維母細胞
細胞類型	轉化細胞係
疾病特征	正常
細胞形態	上皮細胞樣
生長特性	貼壁生長
形態特點	相對平坦，單層扁平形態，沒有明顯的細胞重疊和細胞空隙（hole）
E1基因	含有穩定整合的E1基因拷貝，提供生成重組腺病毒所需的E1蛋白（E1a和E1b）
受體表達	可表達異常的玻連蛋白的細胞表麵受體(ti) ，由整合素β1亞(ya) 單位和玻連蛋白受體(ti) α-v亞(ya) 單位組成
生物安全級別	2級
規格	T25瓶或者1mL凍存管包裝
培養基	DMEM（高糖）培養基，90%；CBS（胎牛血清），10%；1%雙抗
生長條件	氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%；溫度：37℃
傳代方法	1:3至1:4，每周2-3次換液
倍增時間	~40-60小時
凍存條件	55%基礎培養基+40%FBS+5%DMSO，液氮保存
支原體檢測	陰性
運輸	凍存的細胞幹冰運輸，複蘇的細胞冰袋運輸
操作注意事項	細胞貼壁鬆散，操作時需輕柔；換液時需預熱培養(yang) 基；收貨時如有大塊脫落的細胞團，為(wei) 正常現象
細胞簡介	293A細胞是293細胞的亞(ya) 克隆，形態相對平坦，具有良好的貼壁能力，單層扁平形態有助於(yu) 病毒滴定和空斑測定。

培養教程

293A人胚胎腎細胞係培養

細胞複蘇步驟

將含有1ml 293A細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水麵要低於(yu) 凍存管蓋部）搖晃解凍。
移入事先準備好的含有4ml培養(yang) 基的15ml離心管中混合均勻。
在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，加入1ml培養(yang) 基後吹勻。
將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜。第二天換液並檢查293A細胞密度。

傳代步驟

當293A細胞密度達80%-90%時，可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
加2ml消化液（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況。若293A細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加入少量培養(yang) 基終止消化。
按6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕吹打均勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。
收到293A細胞後首次傳(chuan) 代推薦將細胞懸液按1:2的比例分到新的含6ml培養(yang) 基的培養(yang) 皿或瓶中。建議凍存一支備用，後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2到1:4的比例進行。

細胞凍存步驟

待293A細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。
棄去培養(yang) 基後，PBS清洗瓶底1-2次後加入1ml胰酶，細胞變圓脫落後，加入2ml完全培養(yang) 基終止消化。可使用血球計數板計數。
在1000RPM離心5分鍾去掉上清，用血清重懸，加DMSO至最終濃度為(wei) 10%。加入DMSO後迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中。每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。
將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80℃冰箱，至少2小時後轉入液氮罐儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次取用。

培養過程中注意事項

傳(chuan) 代時機: 當293A細胞密度達80%-90%匯合時進行傳(chuan) 代。建議傳(chuan) 代比例為(wei) 1:3到1:5。
貼壁細胞: 293A細胞貼壁鬆散，操作時需輕柔。換液時需預熱培養(yang) 基。收貨時如有大塊脫落的細胞團為(wei) 正常現象。
生長適應性: 293A細胞生長明顯適應酸性環境，pH值在6.9～7.1時可順利貼壁生長。換液時動作要輕，使用高糖的DMEM培養(yang) 基。
觀察頻率: 複蘇接種後24小時內(nei) ，應盡量減少觀察細胞次數或不作觀察，以免因晃動而影響293A細胞貼壁。複蘇後48小時左右觀察貼壁情況並進行首次更換培養(yang) 基比較合適。
轉染建議: 建議使用10代內(nei) 的293A細胞進行轉染。使用磷酸鈣轉染時，當293A細胞生長到1/2或2/3時進行轉染，可避免細胞大量脫落。

處理細節

細胞脫落處理: 收到293A細胞後放培養(yang) 箱靜止2-4小時，觀察細胞是否再次恢複貼壁。如果貼壁，可去除培養(yang) 基，輕柔PBS洗一次後加入Trypsin消化30-60秒，加入DMEM完全培養(yang) 基終止消化，吹打4-6次至細胞全成單個(ge) 懸浮細胞。
促進貼壁: 必要時可使用多聚賴氨酸、纖連蛋白進行包被，促進293A細胞的延展和貼壁。

轉染小技巧

建議使用10代內(nei) 的293A細胞進行轉染。
磷酸鈣轉染時，避免細胞過度生長，最佳狀態為(wei) 293A細胞生長到1/2或2/3時進行轉染。
慢病毒感染後，建議收取兩(liang) 次病毒液。48小時建議用正常血清濃度培養(yang) 收毒，72小時建議使用低濃度血清進行培養(yang) ，這樣收的毒液滴度會(hui) 大大增加。
使用大瓶培養(yang) 比小瓶更有利於(yu) 293A細胞均勻分布和營養(yang) 攝取，促進病毒顆粒釋放。