caki-2細胞係（人腎透明細胞癌細胞係、乳頭狀腎細胞癌細胞）

Caki-2細胞是從(cong) 一位69歲白人男性的原發性腎透明細胞癌中分離得到的。caki-2細胞係由J. Fogh分離並建立，屬於(yu) 原發性腎癌的另一株細胞係。

caki-2細胞染色體(ti) 核型顯示為(wei) 低五倍體(ti) 至低六倍體(ti) ，存在多種異常，包括雙著絲(si) 粒、端著絲(si) 粒碎片、分鍾染色體(ti) 、斷裂和大的近著絲(si) 粒標記。
Caki-2細胞在實驗條件下表現出明顯的致瘤性，在裸鼠體(ti) 內(nei) 能夠形成透明細胞癌。caki-2細胞表麵的抗原顯示為(wei) 血型A，Rh-。Caki-2細胞表達多種同工酶如AK-1、ES-D、G6PD、GLO-I、Me-2、PGM1和PGM3。

Caki-2細胞在裸鼠正位和皮下植入形成的腫瘤表現為(wei) 囊性乳頭狀腎細胞癌的特征。超微結構觀察顯示，細胞具有微絨毛和微絲(si) 結構，但線粒體(ti) 含量較少。

caki-2細胞係特性

• 源自一位69歲白人男性的原發性腎透明細胞癌，是從(cong) 原發性腎癌中分離的細胞係。

• 染色體(ti) 異常為(wei) 低五倍體(ti) 至低六倍體(ti) （+A2、+A3、+B、+C、+D、+F、+G、-A），異常包括雙著絲(si) 粒、端著絲(si) 粒碎片、分鍾染色體(ti) 、斷裂和大的近著絲(si) 粒標記。

• caki-2細胞具有致瘤性，在裸鼠身上形成透明細胞癌。

• 抗原表達：血型A；Rh-。

• 同工酶：AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，1-2；Me-2，1；PGM1，1；PGM3，1。

• 超微結構特征包括微絨毛和微絲(si) ，線粒體(ti) 、溶酶體(ti) 或脂滴很少。

• 根據Kovacs等人的標準，最近在裸鼠正位和皮下植入形成的腫瘤被評估為(wei) 囊性乳頭狀腎細胞癌。

caki-2細胞係參數表

caki-2人腎透明細胞癌細胞係培養

傳代步驟

• 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗Caki-2細胞1-2次。

• 加入2 mL消化液（0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾。在顯微鏡下觀察細胞的消化情況，待大部分細胞變圓並脫落後，迅速將培養(yang) 瓶拿回操作台，輕敲幾下並加入少量培養(yang) 基終止消化。

• 按瓶補加6-8 mL培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在1000 RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液。補加1-2 mL培養(yang) 液後吹勻。

• 首次傳(chuan) 代時，將Caki-2細胞懸液按1：2的比例分到新的含6 mL培養(yang) 基的培養(yang) 皿或瓶中。建議凍存備份，並根據實際情況調整後續傳(chuan) 代的分裂比例。

凍存步驟

• 細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，用PBS清洗一遍，加入1 mL胰酶。細胞變圓脫落後，加入1 mL含血清的培養(yang) 基終止消化，使用血球計數板計數。

• 在1000 RPM條件下離心4分鍾，去掉上清液。加入1 mL血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，確保DMSO終濃度為(wei) 5%。細胞密度不低於(yu) 1x10^6/mL，每支凍存管凍存1 mL細胞懸液，注意做好標識。

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80度冰箱至少2小時，隨後轉入液氮長期儲(chu) 存。記錄凍存管位置以備取用。

解凍步驟

• 將Caki-2細胞凍存管置於(yu) 37°C水浴中輕輕搖晃解凍，約2分鍾。

• 解凍後立即取出凍存管，用70%乙醇消毒。此後的所有操作需在嚴(yan) 格無菌條件下進行。

• 將解凍後的細胞內(nei) 容轉移到含9.0 mL完整生長基質的離心管中，以125 x g離心5-7分鍾，將細胞沉澱重懸於(yu) 推薦的完整生長基質中。分裝至25 cm^2或75 cm^2培養(yang) 瓶中，並在放入培養(yang) 箱前至少15分鍾將培養(yang) 瓶中的完整生長基質置於(yu) 孵育箱中，使培養(yang) 基恢複到正常pH（7.0至7.6）。

• 在37°C條件下孵育，如使用產(chan) 品說明書(shu) 中描述的培養(yang) 基，推薦在5% CO2的空氣氣氛下進行。