AAV-293 人胚腎細胞

AAV-293人胚腎細胞源自普遍使用的HEK-293細胞株，但AAV-293細胞產(chan) 生的病毒滴度更高。AAV-293細胞反式表達腺病毒E1基因，當共轉染三個(ge) AAV助質粒(一個(ge) 含ITR的質粒、pAAV-RC和E1缺失助質粒)時，AAV-293細胞可以產(chan) 生有感染力的腺病毒-相關(guan) 病毒顆粒；推薦AAV-293細胞株繁殖腺病毒相關(guan) 重組病毒。

AAV-293細胞是一種針對無輔助係統中AAV病毒顆粒包裝而優(you) 化的HEK293細胞係。
AAV-293細胞和HEK293細胞一樣，產(chan) 生腺病毒E1基因在反式中，當細胞與(yu) 三種病毒共轉染時，可以產(chan) 生感染性腺相關(guan) 病毒顆粒AAV無輔助係統質粒（含ITR的質粒pAAV-RC和E1缺失的pHelper質粒），由感染 AAV-293 細胞製備的重組 AAV-2 病毒顆粒可用於(yu) 感染多種哺乳動物細胞。

AAV-293細胞係是從(cong) 用人5型腺病毒DNA轉化的原代胚胎人腎建立的永久性細胞係。腺病毒E1區編碼的基因（E1a和E1b）在這些細胞中表達，並參與(yu) 病毒啟動子的反式激活，使AAV-293細胞產(chan) 生高水平的蛋白質。AAV-293來源於(yu) 親(qin) 本293細胞係，通過克隆和多輪測試，AAV-293在無輔助物的係統中被專(zhuan) 門選擇用於(yu) 高水平的AAV生產(chan) 。與(yu) 常規293細胞相比，它有幾個(ge) 優(you) 點：更大的細胞表麵積導致更高的轉染率和更好的AAV產(chan) 量。
AAV-293細胞其優(you) 點是扁平的形態，牢固地附著在培養(yang) 板上，細胞是大規模培養(yang) 和AAV生產(chan) 的理想選擇。腺相關(guan) 病毒（AAV）屬於(yu) 細小病毒科，是單鏈和無包膜DNA病毒中最小的一組病毒。

AAV-293人胚腎細胞特性

• HEK-293細胞經剪切過的腺病毒5型DNA轉染，形成AAV-293細胞。

• AAV-293細胞反式表達腺病毒E1基因，能夠與(yu) 三個(ge) AAV助質粒共轉染產(chan) 生有感染力的腺病毒-相關(guan) 病毒顆粒。

• 推薦使用AAV-293細胞株進行腺病毒相關(guan) 重組病毒的生產(chan) 。

• AAV-293細胞適用於(yu) AAV病毒的複製和包裝，提供了所需的反式作用因子。

• AAV-293細胞在無輔助係統中表現出優(you) 化的腺病毒顆粒包裝能力。

• AAV-293細胞的優(you) 勢包括高病毒滴度和穩定的表達特性。

• 細胞形態為(wei) 上皮細胞樣，適合貼壁培養(yang) ，提供了大表麵積用於(yu) 高產(chan) 量的AAV生產(chan) 。

• 細胞經過多輪測試和克隆，被專(zhuan) 門選用用於(yu) 生產(chan) 重組AAV-2病毒顆粒。

AAV-293人胚腎細胞參數表

AAV-293人胚腎細胞培養

細胞傳代

• 當AAV-293細胞密度達80%-90%時，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

• 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗AAV-293細胞1-2次。

• 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消化。

• 按6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。

• 收到AAV-293細胞後首次傳(chuan) 代推薦將細胞懸液按1:2的比例分到新的含6ml培養(yang) 基的新皿中或瓶中，建議凍存一支備用，後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2到1:4的比例進行。

凍存步驟

• AAV-293細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS清洗一遍後加入1ml胰酶，細胞變圓脫落後，加入1ml含血清的培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。

• 4分鍾1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸AAV-293細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為(wei) 5%，細胞密度不低於(yu) 1x10^6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(ge) 小時以後轉入液氮罐儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

操作注意事項

• AAV-293細胞較喜歡成團生長，比較嬌嫩，怕冷。傳(chuan) 代時不要一次從(cong) 二氧化碳培養(yang) 箱拿出很多瓶，一次隻要拿2-3瓶出來傳(chuan) 就可以了，否則AAV-293細胞很容易死掉。

• 細胞在50-60%密度時傳(chuan) 代，AAV-293細胞生長狀態最好。

• 用D-Hank’s液配製成0.25%的胰酶消化半分鍾左右，棄去胰酶。觀察培養(yang) 瓶是否有針孔樣縫隙，如有就可以加入培養(yang) 液吹打AAV-293細胞。消化過久，對細胞損害很大，而且成團很難吹打成單個(ge) 細胞。然後加入含有10%小牛血清的DMEM輕輕放入二氧化碳培養(yang) 箱中培養(yang) 。