MRC-5人胚肺成纖維細胞

MRC-5人胚肺成纖維細胞是一種可以製造疫苗（包括甲型肝炎、脊髓灰質炎和MCR-5）的二倍體(ti) 細胞係。由J.P. Jacobs於(yu) 1966年9月從(cong) 一名27歲流產(chan) 女性的14周男性胚胎的肺組織中分離而建立。MRC-5細胞是成纖維細胞樣的，貼壁生長。MRC-5細胞對人類病毒易感，包括人類脊髓灰質炎病毒1型、單純皰疹病毒和水泡性口炎病毒等。

MRC-5細胞的染色體(ti) 數目為(wei) 46個(ge) ，屬於(yu) 正常二倍體(ti) 細胞係，核型為(wei) 46，XY。在培養(yang) 基中，MRC-5細胞表現出成纖維細胞樣的形態學特征，包括長梭形的外形、豐(feng) 富的胞漿以及變形的細胞核。MRC-5細胞具有較高的增殖能力，在老化前能傳(chuan) 代42到46次群體(ti) 倍增，目前已被用於(yu) 疫苗生產(chan) ，包括甲型肝炎、小兒(er) 麻痹症、麻疹混合疫苗、水痘疫苗和脊髓灰質炎疫苗等的研發。

MRC-5細胞被證實為(wei) 非惡性細胞，不具有腫瘤形成的能力，在體(ti) 外細胞實驗中相對安全。

逆轉錄酶表達陰性的特性表明MRC-5缺乏完整的逆轉錄病毒基因組。有研究顯示，MRC-5很可能是未定義(yi) 的人臍帶來源的間充質幹細胞係（MSC），並且其表麵標記物表達結果與(yu) MSC幾乎相同。這些細胞具有非致瘤性和極低的端粒酶活性。此外，MRC-5能夠有效抑製絲(si) 裂原活化的淋巴細胞增殖，並促進調節性T細胞的增加。它們(men) 還對炎性細胞因子如IFN-γ和TNF-α做出響應，並表達IDO1。

MRC-5人胚肺成纖維細胞很可能是未定義(yi) 的人臍帶來源的間充質幹細胞係（MSC），其與(yu) MSC相似的表麵標記物表達結果進一步支持了這一觀點。這些細胞具有非致瘤性且端粒酶活性極低的特性，能夠有效抑製絲(si) 裂原活化的淋巴細胞增殖，並促進調節性T細胞的增加。此外，它們(men) 還對炎性細胞因子如IFN-γ和TNF-α做出響應，並表達IDO1。

MRC-5細胞係病毒易感性：人類脊髓灰質炎病毒，單純皰疹病毒，水泡性口腔炎，格拉斯哥（印第安納州），水泡性口腔炎（印第安納州），因此，MRC-5人胚肺成纖維細胞常被用於(yu) 療效試驗、轉染宿主、細胞毒性和病毒滅絕試驗。

MRC-5人胚肺細胞產品參數表

MRC-5人胚肺細胞生長速率圖

HMRC-5人胚肺細胞注意事項

該細胞為(wei) 有限傳(chuan) 代細胞係，傳(chuan) 代次數過高會(hui) 導致細胞生長特性發生變化，建議到貨3代內(nei) 完成實驗。

培養(yang) 條件：

MRC-5細胞推薦使用MEM培養(yang) 基，並添加10%特級胎牛血清，1%NEAA、1%丙酮酸鈉和1%穀氨酰胺。在培養(yang) 過程中，維持氣相為(wei) 空氣95%和CO2 5%，溫度為(wei) 37℃。

培養(yang) 步驟：

收到細胞後，先觀察培養(yang) 瓶是否完好，若有異常情況及時與(yu) 提供細胞的機構聯係。

用75%酒精處理培養(yang) 瓶表麵，然後將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中靜置2-4小時，以穩定細胞狀態。

將培養(yang) 基預熱至37℃。

吸取培養(yang) 瓶中大部分培養(yang) 基，並留下10-12ml，觀察MRC-5人胚肺成纖維細胞密度並拍照記錄。若細胞密度大於(yu) 80%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

如細胞密度低於(yu) 70%，可留下8-10ml培養(yang) 基繼續培養(yang) ，直至細胞密度達到80%以上再進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

若進行傳(chuan) 代培養(yang) ，先吸取原有培養(yang) 基，然後加入胰酶消化1-2分鍾，觀察細胞變圓脫落後加入適量的含血清的培養(yang) 基終止消化。

輕輕混勻細胞後，以適當的速度離心5分鍾，棄去上清液，並補充1-2ml新的培養(yang) 基。

將MRC-5人胚肺成纖維細胞均勻地分到新的培養(yang) 瓶中，補足培養(yang) 基，並放回培養(yang) 箱中培養(yang) 。

細胞凍存：

將細胞按照傳(chuan) 代步驟進行消化，並離心至獲得細胞沉澱。

加入預先配製好的凍存液輕輕重懸細胞，並轉移至標記好的凍存管中。

將凍存管放入程序性凍存盒中，然後置於(yu) -80℃冰箱過夜。

24小時後，將細胞轉移到液氮保存，並記錄細胞保存位置。

細胞複蘇：

準備完全培養(yang) 基並準備37℃水浴器。

從(cong) 液氮中取出MRC-5人胚肺成纖維細胞，迅速放入37℃溫水中融化，然後離心1-2分鍾。

棄去凍存液，加入完全培養(yang) 基輕輕重懸細胞，然後接種至培養(yang) 皿。