T84人結腸癌細胞係（人結腸腺癌肺轉移細胞係）

T84細胞係源自一名72歲男性結腸癌患者的肺轉移灶，是一種可移植的人類癌細胞係。
T84細胞係具有56條染色體(ti) ，多倍體(ti) 發生率為(wei) 12.4%，並且28%的細胞表現出多倍體(ti) 。大多數中期細胞中觀察到18個(ge) 標記，正常的X染色體(ti) 和13號染色體(ti) 缺失。2號、4號和22號染色體(ti) 為(wei) 單拷貝，而12號染色體(ti) 則有4拷貝。Q帶分析未發現Y染色體(ti) 。約50%的細胞出現了染色體(ti) 不穩定性（DM）。

在無胸腺小鼠中，通過連續傳(chuan) 代23次建立了T84細胞係。T84細胞在培養(yang) 中表現為(wei) 單層融合結構，並顯示出緊密的連接和橋粒。

T84人結腸癌細胞係特性特征

• 癌胚抗原（CEA）：在細胞培養(yang) 中，CEA的表達量為(wei) 每10天每10^6個(ge) 細胞600 ng/mL。

• 角蛋白：細胞在免疫過氧化物酶染色中顯示角蛋白陽性反應。

• T84細胞表達多種肽類激素和神經遞質的受體(ti) ；維持電解質的定向運輸能力

• 具有致瘤性：T84細胞在裸小鼠中21天內(nei) 100%形成腫瘤；裸鼠移植過程中保持原始結腸癌的組織學特征；
  

• 具有轉移性，特別是肺轉移；

• 同工酶表達：AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，1-2；Me-2，1-2；PGM1，1；PGM3，1

• 功能特性：形成緊密連接，參與(yu) 構建腸道屏障；具有多種肽類激素和神經遞質的受體(ti) ；維持電解質的定向運輸能力

T84人結腸癌細胞係參數表

T84人結腸癌細胞係培養教程

T84細胞複蘇

• 準備：預熱T84細胞培養(yang) 基至37℃；預熱水浴鍋至37℃

• 解凍：從(cong) 液氮罐中取出T84細胞凍存管，迅速在37℃水浴中解凍，輕輕搖動凍存管，約1-2分鍾

  
  

• 處理細胞：

• 解凍後用75%乙醇消毒凍存管外表麵

• 在無菌操作台中，將T84細胞懸液轉移至15ml離心管

• 加入10ml預熱的完全培養(yang) 基，輕輕混勻

  
  

• 離心：以1000rpm離心5分鍾，棄去上清液；重懸T84細胞於(yu) 10ml預熱的完全培養(yang) 基中

• 接種：將T84細胞懸液轉移至T25培養(yang) 瓶中；放入37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang)

T84細胞傳代

• 準備：預熱培養(yang) 基至37℃；預熱胰蛋白酶（Trypsin-EDTA）至37℃

• 觀察：使用倒置顯微鏡觀察T84細胞，確認細胞融合度達到70-80%

• 去除舊培養(yang) 基：在無菌操作台中，吸去培養(yang) 瓶中的舊培養(yang) 基

• 洗滌：加入5ml無鈣鎂PBS（磷酸鹽緩衝(chong) 液），輕輕搖動培養(yang) 瓶，然後去除PBS

• 消化細胞：加入1-2ml胰蛋白酶，均勻覆蓋T84細胞層；放入培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，觀察細胞開始脫落

• 中和胰蛋白酶：加入5-10ml預熱的完全培養(yang) 基中和胰蛋白酶；輕輕吹打細胞懸液，確保T84細胞完全脫落

• 離心：以1000rpm離心5分鍾，棄去上清液；重懸T84細胞於(yu) 適量的完全培養(yang) 基中

• 接種：根據需要將T84細胞懸液分裝到新的培養(yang) 瓶中；添加適量的完全培養(yang) 基，放入培養(yang) 箱中培養(yang)

T84細胞凍存

• 準備：預熱培養(yang) 基和凍存液（10% DMSO + 90% FBS）至4℃

• 收集細胞：按照傳(chuan) 代步驟消化並收集T84細胞

• 離心：以1000rpm離心5分鍾，棄去上清液

• 重懸細胞：將T84細胞重懸於(yu) 冷凍保存液中，細胞濃度為(wei) 1-2 x 10^6 cells/ml

• 分裝：將T84細胞懸液分裝至凍存管中，每管1ml

• 程序降溫：將凍存管放入程序降溫盒中，以-1℃/分鍾的速度降溫至-80℃

• 轉移液氮罐：24小時後，將凍存管轉移至液氮罐中長期保存

T84細胞的培養環境控製參數

• 溫度：37℃

• 二氧化碳濃度：5% CO₂，以維持T84細胞培養(yang) 基的pH值在7.2-7.4範圍內(nei)

• 濕度：高濕度（通常95%以上）以防止培養(yang) 基蒸發

T84細胞的培養時間

• 複蘇後：T84細胞複蘇後通常需24-48小時貼壁和恢複

• 傳(chuan) 代周期：T84細胞通常在達到70-80%融合度時進行傳(chuan) 代，約需2-3天

• 實驗準備：如果用於(yu) 實驗，T84細胞通常需要在傳(chuan) 代後再培養(yang) 1-2天以確保細胞狀態穩定