LS174T細胞（人結腸腺癌細胞）

LS 174T細胞係來源於(yu) 一名58歲白人女性的結直腸腺癌患者，分離自其結腸組織。ls174t細胞係來源於(yu) 杜克氏B型腺癌，通過將組織切碎後，經過10個(ge) 月的培養(yang) 獲得。LS174T細胞展示了上皮形態，並用於(yu) 癌症研究。
LS 174T細胞係具有45, X；X染色體(ti) 缺失1條，未見其他染色體(ti) 畸變。

LS174T細胞特性特征

• 癌基因表達：myc+；myb+；ras+；fos+；p53+；sis；abl-；ros；src-

• 抗原表達：直腸抗原3陽性、p53抗原表達陰性，但mRNA表達陽性、角蛋白染色陽性、HLA-A2、B13、B50表達、血型為(wei) O型

• 基因表達和產(chan) 物：產(chan) 生大量癌胚抗原（CEA）、表達白細胞介素10（IL-10）、表達白細胞介素6（IL-6）、產(chan) 生粘蛋白

• 致瘤性：ls174t細胞在裸小鼠中具有高度致瘤性（皮下接種10^7個(ge) 細胞後21天內(nei) 100%形成腫瘤）

• ls174t細胞比親(qin) 本細胞係LS 180更易於(yu) 傳(chuan) 代培養(yang)

• ls174t細胞是LS 180細胞係的胰蛋白酶化變種，通過在傳(chuan) 代培養(yang) 方案中使用胰蛋白酶來維持。

LS174T細胞參數表

LS174T人結腸腺癌細胞培養教程

細胞複蘇

• 從(cong) 液氮中取出凍存管，迅速置於(yu) 37°C水浴中解凍，搖動管子以確保均勻受熱，解凍時間約1-2分鍾。

• 解凍後，用75%酒精消毒凍存管外表麵，然後在無菌操作台上將LS174T細胞懸液轉移至含10 ml完全培養(yang) 基的離心管中。

• 以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液。

• 加入10 ml新鮮完全培養(yang) 基，輕輕吹打LS174T細胞以確保均勻懸浮。

• 將細胞懸液轉移至培養(yang) 瓶中，放入培養(yang) 箱中進行培養(yang) 。

細胞培養

• 每2-3天更換一次培養(yang) 基，以保持LS174T細胞的生長環境。

• 當LS174T細胞匯合度達到70-80%時，進行傳(chuan) 代操作。

細胞傳代

• 吸去舊培養(yang) 基，用無鈣鎂PBS清洗LS174T細胞1-2次。

• 加入適量0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37°C孵育1-3分鍾，觀察細胞是否脫落。

• 輕輕敲打培養(yang) 瓶以確保LS174T細胞完全脫落。

• 添加完全培養(yang) 基以中和胰蛋白酶，輕輕吹打細胞以均勻懸浮。

• 按1:2至1:4的比例將LS174T細胞懸液分裝到新的培養(yang) 瓶中，加入新鮮培養(yang) 基。

• 將培養(yang) 瓶放入培養(yang) 箱繼續培養(yang) 。

細胞凍存

• 當LS174T細胞達到70-80%匯合度時，按傳(chuan) 代步驟收集細胞。

• 以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液。

• 加入凍存液（60%基礎培養(yang) 基 + 30% FBS + 10% DMSO），輕輕吹打LS174T細胞使其均勻懸浮。

• 將細胞懸液分裝到凍存管中，每管1 ml。

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，-80°C預凍過夜。

• 次日轉移至液氮中進行長期保存。

注意事項

• 在細胞培養(yang) 和處理過程中務必保持無菌操作，以防LS174T細胞汙染。

• 胰蛋白酶消化時間需嚴(yan) 格控製，以免對LS174T細胞造成損傷(shang) 。

• 凍存和複蘇過程應盡量避免對LS174T細胞的機械損傷(shang) 。