RKO細胞係（人結腸腺癌細胞係）

RKO細胞係來源於(yu) 人類結腸腺癌組織，是一種低分化的結腸癌細胞係，最早由美國國家癌症研究所（NCI）的研究人員分離和建立。RKO細胞具有上皮樣細胞形態，主要以貼壁生長的方式繁殖。
RKO細胞是RKO-E6和RKO-A545-1的親(qin) 本細胞係（同源）。RKO細胞可以用作研究p53和gadd45對細胞參數影響的對照細胞係。

RKO細胞係特性特征

• P53基因：RKO細胞含有野生型P53基因，P53蛋白水平高於(yu) 其衍生細胞係RKO-E6。

• 甲狀腺受體(ti) ：RKO細胞缺乏內(nei) 源性人甲狀腺受體(ti) 核受體(ti) (h-TRβ1)。

• 尿激酶受體(ti) （u-PAR）：RKO細胞表達尿激酶受體(ti) （u-PAR），這在癌症侵襲和轉移過程中起重要作用。
  

• 致瘤性：RKO細胞在裸鼠中具有成瘤性，並能在軟瓊脂中形成集落，這表明其具有較強的惡性特性和侵襲能力。

• 低分化：RKO細胞是一個(ge) 低分化的結腸癌細胞係，表明其具有較高的增殖能力和較低的分化狀態。
  

• 相關(guan) 細胞係：RKO細胞是RKO-E6細胞和RKO-AS45-1細胞的親(qin) 本細胞係

RKO細胞係參數表

RKO人結腸腺癌細胞係培養教程

RKO細胞複蘇

• 從(cong) 液氮中取出凍存管，迅速放入37°C水浴中解凍RKO細胞

• 解凍後立即將RKO細胞懸液轉移到含預熱培養(yang) 基的離心管中

• 1000 rpm離心5分鍾，棄上清

• 用新鮮培養(yang) 基重懸RKO細胞，轉移到培養(yang) 瓶中

日常培養

• 每2-3天更換一次培養(yang) 基；觀察RKO細胞生長狀態，密度達到70-80%時進行傳(chuan) 代

RKO細胞傳代

• 用PBS輕輕清洗RKO細胞層1-2次

• 加入適量胰蛋白酶-EDTA溶液，37°C孵育2-3分鍾

• 輕輕拍打培養(yang) 瓶，使RKO細胞脫落

• 加入含血清的培養(yang) 基終止消化

• 1000 rpm離心5分鍾，棄上清

• 用新鮮培養(yang) 基重懸RKO細胞，按1:2至1:6的比例接種到新的培養(yang) 瓶中

RKO細胞凍存

• 收集對數生長期的RKO細胞

• 製備凍存液：90%血清 + 10% DMSO

• 調整RKO細胞濃度至1×10^6 cells/mL

• 將RKO細胞懸液分裝到凍存管中

• 使用程序降溫盒，將RKO細胞緩慢降溫至-80°C

• 24小時後轉移到液氮中長期保存

注意事項

• 細胞汙染:

• 嚴(yan) 格遵守無菌操作規程，定期進行支原體(ti) 檢測，確保RKO細胞培養(yang) 環境和培養(yang) 基的無菌狀態。

• 避免不同細胞係之間的交叉汙染，使用專(zhuan) 用的培養(yang) 設備和耗材。

  
  

• 培養(yang) 條件不當:

• 保持培養(yang) 箱溫度恒定在37°C，避免溫度波動影響RKO細胞。

• 確保培養(yang) 箱氣相為(wei) 95%空氣 + 5%二氧化碳，避免二氧化碳濃度波動。

• 維持培養(yang) 箱濕度在70%-80%，避免培養(yang) 基蒸發過快。

  
  

• 培養(yang) 基問題:

• 使用新鮮、無菌的培養(yang) 基，避免使用過期或受汙染的培養(yang) 基。

• 選擇優(you) 質胎牛血清（FBS），確保RKO細胞培養(yang) 血清的穩定性和一致性。

• 避免長期依賴抗生素，以防抗生素耐藥性。

  
  

• 細胞處理不當:

• 避免胰蛋白酶消化時間過長，消化時間一般為(wei) 1-2分鍾。

• 保持RKO細胞密度在適當範圍內(nei) （70-80%），避免過度生長或細胞稀疏。

  
  

• 傳(chuan) 代和凍存問題:

• 記錄RKO細胞傳(chuan) 代次數，避免使用傳(chuan) 代次數過多的細胞。

• 使用程序降溫盒緩慢降溫至-80°C，再轉移到液氮中長期保存RKO細胞。複蘇時迅速解凍並立即加入預熱培養(yang) 基。

  
  

• 培養(yang) 基更換頻率:

• 每2-3天更換一次培養(yang) 基，保持培養(yang) 基新鮮。

  
  

• 細胞狀態監控:

• 定期觀察RKO細胞形態和生長狀態，及時處理異常情況，如細胞形態變化、增殖緩慢或死亡率增加。