RKO-E6人結腸癌轉基因細胞

RKO-E6細胞係是通過將人乳頭狀病毒（HPV）E6癌基因轉染入人結腸癌細胞係RKO而獲得的。
RKO-E6細胞係的轉基因特性包括：HPV E6基因通過脂質體(ti) 法轉染入細胞，使用的載體(ti) 為(wei) pCMV（巨細胞病毒啟動子）。該基因穩定地整合在細胞基因組中，並受到巨細胞病毒啟動子的控製。
RKO-E6細胞係可以與(yu) 其親(qin) 本細胞係RKO一起使用，以研究p53缺失對細胞參數的影響，如p53介導的轉錄和凋亡。

RKO-E6人結腸癌轉基因細胞特征特性

• p53蛋白水平：RKO-E6細胞中的p53蛋白水平顯著低於(yu) 其親(qin) 本細胞係RKO，這是由於(yu) HPV E6蛋白的表達導致p53蛋白被降解。

• HPV E6蛋白表達：RKO-E6細胞穩定表達人乳頭瘤病毒（HPV）E6蛋白，該蛋白與(yu) p53結合並促進其泛素化降解，從(cong) 而降低p53蛋白水平。

• DNA損傷(shang) 修複能力：RKO-E6細胞對紫外線誘導的DNA損傷(shang) 修複能力降低，這主要是由於(yu) p53功能受到抑製，影響了p53介導的DNA修複通路。

• HPV E6基因表達：RKO-E6細胞中的HPV E6基因受巨細胞病毒（CMV）啟動子控製，確保了E6基因的持續高效表達。

• p53功能抑製：由於(yu) E6蛋白的表達，RKO-E6細胞中的p53蛋白功能受到顯著抑製，但並非完全缺失。

• h-TRβ1表達：RKO-E6細胞和其親(qin) 本RKO細胞均缺乏內(nei) 源性人甲狀腺受體(ti) 核受體(ti) β1（h-TRβ1）的表達。

• 轉基因整合：HPV E6基因通過脂質體(ti) 法轉染，並穩定整合到RKO細胞基因組中，形成RKO-E6細胞係。

• 野生型p53基因：RKO-E6細胞保留了野生型p53基因，但其蛋白產(chan) 物受到E6蛋白的抑製。

• 應用價(jia) 值：RKO-E6細胞可與(yu) RKO細胞對比，用於(yu) 研究p53功能抑製對細胞行為(wei) 的影響，包括但不限於(yu) 轉錄調控、凋亡、細胞周期和DNA損傷(shang) 修複等過程。

• 成瘤性：RKO-E6細胞保留了RKO細胞的成瘤性，能在免疫缺陷小鼠中形成腫瘤，並在體(ti) 外軟瓊脂中形成集落，這反映了其轉化表型。

RKO-E6人結腸癌轉基因細胞參數表

RKO-E6人結腸癌轉基因細胞培養教程

傳代方法

• 用PBS輕輕衝(chong) 洗RKO-E6細胞單層。

• 加入適量胰蛋白酶-EDTA溶液，在37℃孵育2-3分鍾。

• 輕輕拍打培養(yang) 瓶，使RKO-E6細胞脫落。

• 加入等量完全培養(yang) 基終止消化。 

• 離心收集RKO-E6細胞，重懸於(yu) 新鮮完全培養(yang) 基中。

• 按所需比例接種到新的培養(yang) 瓶中。

細胞凍存

• 凍存液：90%完全培養(yang) 基 + 10% DMSO

• 凍存密度：約5 x 10^6 cells/ml

• 緩慢降溫：逐步降溫至-80℃，最終保存在液氮中。

細胞複蘇

• 快速解凍RKO-E6細胞於(yu) 37℃水浴中。

• 將細胞懸液轉移到含有預熱完全培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中。

• 24小時後更換新鮮培養(yang) 基，去除DMSO。

注意事項

• 細胞監測：定期觀察RKO-E6細胞的形態和生長狀態，確保細胞保持其特征性表型。

• 無菌操作：嚴(yan) 格保持無菌操作，以防止汙染。

• 傳(chuan) 代管理：避免RKO-E6細胞過度生長，及時傳(chuan) 代。

• 支原體(ti) 檢測：定期進行支原體(ti) 檢測，以確保RKO-E6細胞係的純度和真實性。

特殊要求

• 生物安全：由於(yu) RKO-E6細胞含有轉基因，操作時需遵守生物安全二級實驗室規範。

• 基因表達：觀察RKO-E6細胞是否保持穩定的HPV E6基因表達。

• 頻率：每2-3天更換一次培養(yang) 基。

• 操作方法：小心吸出舊培養(yang) 基，加入預熱的新鮮完全培養(yang) 基。

• 建議範圍：一般建議RKO-E6細胞不超過20-30代，以確保細胞特性的穩定性。

• 根據實驗需求：具體(ti) 傳(chuan) 代次數應根據實驗目的和細胞表現來決(jue) 定。

培養條件下的表現

• 標準條件：在37℃、5% CO2下，使用含10%胎牛血清的MEM培養(yang) 基，RKO-E6細胞通常表現良好，保持其上皮樣形態和貼壁生長特性。

• 血清濃度：降低血清濃度可能會(hui) 影響RKO-E6細胞生長速度，但可能有助於(yu) 某些特定實驗。

• 溫度變化：溫度偏離37℃可能會(hui) 影響RKO-E6細胞生長速度和代謝活性。

• 氧氣濃度：低氧條件可能會(hui) 影響RKO-E6細胞的某些特性，特別是與(yu) 癌症相關(guan) 的研究中。