MEF細胞－小鼠胚肺成纖維細胞（kaiyun网站安全）

小鼠胚肺成纖維細胞（Mouse Embryonic Fibroblasts, MEF）是從(cong) 小鼠胚胎肺組織中分離得到的一種成纖維細胞，主要來源於(yu) C57BL/6小鼠，通常選擇出生後2天的小鼠，通過無菌操作將肺組織切割後，使用酶（如胰蛋白酶和膠原酶）消化獲得單細胞懸液進行體(ti) 外培養(yang) 。MEF細胞呈紡錘形或星形，輪廓清晰，細胞核為(wei) 卵圓形且核仁明顯，細胞質透明，適合貼壁生長。剛分離時，細胞懸浮於(yu) 培養(yang) 基中，30分鍾內(nei) 部分貼壁並伸出偽(wei) 足，6小時後貼壁完全並呈梭形分布；5-7天可達到融合狀態，細胞排列緊密，交叉重疊，形成網狀結構。MEF細胞是肺間質中數量最多的細胞，能夠分泌肺泡壁細胞外基質（如III型膠原、彈性蛋白和蛋白聚糖），在肺部損傷(shang) 修複、細胞因子分泌、維持血管動態平衡及組織重建中發揮重要作用。小鼠胚肺成纖維細胞廣泛應用於(yu) 生物醫學研究，包括基因編輯、幹細胞共培養(yang) 、藥物篩選及肺部疾病機製研究等，因其優(you) 異的生長和分泌特性，成為(wei) 研究細胞間相互作用的重要工具。

mef細胞－小鼠胚肺成纖維細胞特性特征

• MEF細胞主要負責合成和分泌細胞外基質成分，如III型膠原蛋白、彈性蛋白及蛋白多糖。

• 在肺部受損或炎症時，MEF細胞會(hui) 被激活並遷移至損傷(shang) 部位以促進修複和再生。

• 通過免疫熒光染色可以檢測到MEF細胞中常見的標記物，如波形蛋白（Vimentin）和纖維連接蛋白（Fibronectin），這些標記物表明其成纖維細胞的身份。
  

• MEF細胞的基因組中涉及膠原合成、細胞遷移和增殖的基因表達顯著上調，包括：COL1A1 和 COL3A1：編碼I型和III型膠原。FAP（成纖維細胞活化蛋白）：與(yu) 成纖維細胞的活化狀態相關(guan) 。

• 信號通路：MEF細胞在響應炎症或損傷(shang) 時，通過TGF-β、IL-6等信號通路被激活，這些通路促進了膠原合成及細胞增殖

MEF細胞參數表

原代mef細胞－小鼠胚肺成纖維細胞培養教程

細胞複蘇

• 將MEF細胞凍存管從(cong) 液氮中取出，立即置於(yu) 37℃水浴中快速解凍（約1-2分鍾），輕輕搖動以均勻解凍。
  

• 解凍後，將細胞懸液轉移至含4 mL完全培養(yang) 基（如DMEM，含10%胎牛血清）的無菌離心管中，輕輕混勻。

• 在1000 rpm離心3-4分鍾，棄去上清液。
  

• 用1-2 mL新鮮培養(yang) 基重懸MEF細胞，輕輕吹打以確保細胞均勻分散。

• 將細胞懸液接種到培養(yang) 瓶中（如10 cm培養(yang) 皿中加入8 mL培養(yang) 基）。
  

• 放置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中過夜培養(yang) ，讓MEF細胞恢複正常狀態並貼壁生長。

細胞傳代

• 當MEF細胞的匯合度達到80%-90%時，應及時進行傳(chuan) 代，以保持細胞的最佳活性。
  

• 棄去舊培養(yang) 基，加入無鈣、無鎂PBS緩衝(chong) 液輕輕洗滌1-2次，去除殘餘(yu) 培養(yang) 基。
  

• 加入0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA消化液，確保覆蓋MEF細胞單層。
  

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱內(nei) ，消化1-2分鍾，觀察細胞是否變圓並逐漸脫落。

• 輕敲培養(yang) 瓶，加入適量完全培養(yang) 基終止消化反應。
  

• 將細胞懸液轉移至離心管，在1000 rpm離心4分鍾，棄去上清液。

• 用新鮮培養(yang) 基重懸MEF細胞，並按1:2或1:3比例分配到新的培養(yang) 皿或瓶中。
  

• 加入適量培養(yang) 基後，將MEF細胞置於(yu) 培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

細胞凍存

• 將生長良好的MEF細胞經胰酶消化後，轉移到離心管中，以1000 rpm離心4分鍾收集細胞。
  

• 用凍存液（90%完全培養(yang) 基 + 10% DMSO）重懸MEF細胞，調整濃度至5×10⁶至1×10⁷/mL。
  

• 每支凍存管加入1 mL細胞懸液，標明MEF細胞的名稱、凍存日期及其他信息。
  

• 將MEF細胞凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，以每分鍾1℃的速度降至-80℃。
  

• 24小時後，將凍存管轉移至液氮罐中長期保存。