原代小鼠肺血管平滑肌細胞

小鼠肺血管平滑肌細胞（Mouse Pulmonary Vascular Smooth Muscle cells, mPVSMCs）是研究肺動脈高壓及相關(guan) 疾病的重要模型細胞，主要來源於(yu) 成熟小鼠（如C57BL/6品係）的肺動脈組織，通過Ⅰ型膠原酶和木瓜蛋白酶酶解技術進行分離。

肺血管平滑肌細胞是肺動脈壁的重要組成成分，形態呈梭形、不規則形或三角形，細胞核居中，具有α-SMA等特征性標誌物。原代培養(yang) 3天後細胞貼壁並逐漸伸展，2周後形成單層或局部多層重疊排列，細胞密度高時可呈旋渦狀或柵欄狀。

小鼠肺血管平滑肌細胞具有顯著的增殖與(yu) 遷移能力，在肺動脈高壓等病理條件下，這些特性會(hui) 加速疾病的進展。小鼠肺血管平滑肌細胞在疾病機製與(yu) 治療靶點開發中具有重要價(jia) 值。

原代小鼠肺血管平滑肌細胞特性特征

• 生長模式：在低密度時，細胞常交織成網狀；而在高密度時，則排列為(wei) 旋渦狀或柵欄狀。傳(chuan) 代後，細胞生長迅速，通常在4-6天內(nei) 即可匯合。

• 生物標誌物：小鼠肺血管平滑肌細胞表麵表達α-SMA（α平滑肌肌動蛋白），這是平滑肌細胞的特征性標誌物。還可檢測到平滑肌肌球蛋白重鏈、平滑肌22α蛋白等收縮型標誌物。
  

• 介質表達：小鼠肺血管平滑肌細胞表麵表達介質如ICAM-1和VCAM-1，這些分子參與(yu) 血管壁的炎症反應，並與(yu) 多種動脈疾病的發生發展密切相關(guan) 。

• 基因調控：在病理狀態下，例如低氧環境，小鼠肺血管平滑肌細胞可能發生表型轉化，從(cong) 收縮型向合成型轉變。這一轉變伴隨著收縮型標誌物（如α-SMA）表達降低，而合成型標誌物（如骨橋蛋白OPN、波形蛋白VIM等）表達升高。
  

• 增殖與(yu) 遷移能力：小鼠肺血管平滑肌細胞在病理條件下表現出增強的增殖和遷移能力，這與(yu) 肺動脈高壓等疾病的發展有關(guan)

原代小鼠肺血管平滑肌細胞參數表

原代小鼠肺血管平滑肌細胞mPVSMCs培養教程

mPVSMCs細胞複蘇

• 培養(yang) 基預熱：將完全培養(yang) 基置於(yu) 37℃水浴中充分預熱，以準備mPVSMCs細胞的複蘇。

• 細胞解凍：從(cong) 液氮罐或-80℃冰箱中迅速取出mPVSMCs細胞管，放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃，約1分鍾完成解凍。

• 離心去除冷凍保護劑：將解凍後的mPVSMCs細胞移入15 mL離心管中，加入5 mL預熱的完全培養(yang) 基混勻後，以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液。

• 細胞重懸：用2 mL預熱的完全培養(yang) 基輕輕重懸mPVSMCs細胞沉澱。

• 接種培養(yang) ：將重懸後的mPVSMCs細胞移入T25培養(yang) 瓶中，加入適量完全培養(yang) 基，置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 。

• 貼壁觀察：培養(yang) 24小時後觀察mPVSMCs細胞貼壁情況，貼壁良好的細胞為(wei) 後續培養(yang) 的主要對象。

mPVSMCs細胞傳代

• 觀察細胞狀態：當mPVSMCs細胞生長至80%-90%匯合度時，即可進行傳(chuan) 代。

• PBS衝(chong) 洗：吸棄培養(yang) 基，用1 mL PBS緩衝(chong) 液輕輕衝(chong) 洗培養(yang) 瓶1次，以去除培養(yang) 基殘留和血清影響。

• 細胞消化：加入1 mL 0.25%胰酶，均勻覆蓋mPVSMCs細胞表麵，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，觀察細胞收縮並開始脫落。

• 終止消化：加入1 mL完全培養(yang) 基終止胰酶作用，並輕輕拍打培養(yang) 瓶以促進細胞脫落。

• 離心重懸：將mPVSMCs細胞懸液轉移至離心管中，以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液。用適量完全培養(yang) 基重懸細胞，確保分散均勻。

• 細胞接種：按1:2或1:3比例將mPVSMCs細胞分裝至新的T25培養(yang) 瓶中，加入適量完全培養(yang) 基，繼續在37℃、5% CO₂條件下培養(yang) 。

mPVSMCs細胞凍存

• 收集細胞：待mPVSMCs細胞生長至80%-90%匯合時，按上述傳(chuan) 代方法消化並收集細胞沉澱。取少量細胞計數後調整密度至1×10⁶個(ge) /mL。

• 製備凍存液：用預冷的凍存液重懸mPVSMCs細胞沉澱，確保細胞分散均勻。

• 分裝凍存管：將重懸的mPVSMCs細胞溶液分裝至凍存管，每管約1 mL。

• 程序凍存：將凍存管置於(yu) 程序凍存盒中，先放入-80℃冰箱冷凍過夜，隨後轉移至液氮罐中長期保存。

注意事項

• mPVSMCs細胞的解凍與(yu) 凍存需快速操作，以避免溫度波動對細胞活性的影響。

• 消化時間需嚴(yan) 格控製，避免胰酶過度消化導致mPVSMCs細胞損傷(shang) 。

• 培養(yang) 過程中應定期觀察mPVSMCs細胞形態，確保細胞狀態良好且無汙染跡象。

• 凍存液中的DMSO需質量可靠，並確保在凍存前充分預冷。