小鼠原代滑膜成纖維細胞

小鼠原代滑膜成纖維細胞（Mouse Fibroblast-like Synoviocytes, mFLS）是研究關(guan) 節疾病，特別是類風濕性關(guan) 節炎（Rheumatoid Arthritis, RA）的重要細胞模型。小鼠滑膜成纖維細胞主要來源於(yu) 小鼠膝關(guan) 節的滑膜組織，通常選用1至2個(ge) 月大的雄性BALB/c小鼠作為(wei) 實驗動物。在無菌條件下，通過安樂(le) 死後切開膝關(guan) 節，剝離滑膜組織及周圍纖維層，清洗後去除血液和脂肪，將組織剪碎並用膠原酶等酶消化以獲得單個(ge) 細胞。滑膜是關(guan) 節囊的內(nei) 層，主要由疏鬆結締組織構成，其主要功能是分泌滑液以潤滑關(guan) 節並維持其穩定。滑膜中的細胞分為(wei) A型和B型，其中B型滑膜成纖維細胞具有較強的增殖能力，能在體(ti) 外實現傳(chuan) 代培養(yang) 。滑膜成纖維細胞在正常關(guan) 節功能的維持及炎症病理過程的研究中起著關(guan) 鍵作用，廣泛應用於(yu) 關(guan) 節疾病的機製探討和藥物研究。

小鼠原代滑膜成纖維細胞特性特征

• 小鼠滑膜成纖維FLS細胞不含有HIV-1、HBV、HCV及其他常見汙染物。

• 標誌蛋白：FLS細胞表達多種成纖維細胞標誌蛋白，如波形蛋白（Vimentin）、纖維連接蛋白（Fibronectin）和膠原蛋白（Collagen）。

• 炎症因子：FLS細胞能夠分泌多種炎症介質，包括腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）等，這些因子在類風濕性關(guan) 節炎的病理過程中發揮關(guan) 鍵作用。

• 基因表達：FLS細胞在正常和病理狀態下表現出不同的基因表達譜。在類風濕性關(guan) 節炎中，這些細胞的促炎基因表達顯著上調。

• 相關(guan) 研究表明，FLS中NF-κB信號通路的激活與(yu) RA的發展密切相關(guan) 。

• 信號傳(chuan) 導：FLS對外界刺激（如細菌感染或損傷(shang) ）的反應依賴於(yu) 多條信號通路，包括MAPK和JAK/STAT通路，這些通路調控細胞增殖、凋亡及炎症反應

小鼠原代滑膜成纖維細胞參數表

小鼠原代滑膜成纖維細胞培養教程

mFLS細胞複蘇

• 預先將37℃水浴槽準備好，並準備專(zhuan) 用培養(yang) 基。
  

• 從(cong) 液氮罐中取出凍存的mFLS細胞管，迅速置於(yu) 37℃水浴中搖晃，使細胞完全解凍（約1-2分鍾）。
  

• 解凍後，用75%乙醇消毒細胞管外壁，轉移至超淨工作台。

• 將細胞懸液移至含10 ml培養(yang) 基的離心管中，以1000 rpm離心5分鍾去除冷凍保護劑。

• 棄去上清液，將細胞沉澱重懸於(yu) 新鮮培養(yang) 基中，接種至培養(yang) 瓶，置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 。

• 換液：複蘇後12小時觀察貼壁情況，次日更換新鮮培養(yang) 液，去除未貼壁細胞和殘餘(yu) 冷凍劑。

mFLS細胞凍存

• 將mFLS細胞培養(yang) 至對數生長期，棄培養(yang) 液，使用胰蛋白酶消化細胞，加入培養(yang) 基終止消化。
  

• 以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液，用預冷的凍存液重懸細胞，細胞濃度調整為(wei) 1×10⁶-1×10⁷ cells/ml。

• 分裝至凍存管，每管1 ml，確保密封。

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，-1℃/分鍾降溫至-80℃，24小時後轉移至液氮罐長期保存。

mFLS細胞傳代

• 貼壁觀察：當mFLS細胞匯合度達到80%-90%時，開始傳(chuan) 代。

• 棄去培養(yang) 瓶中的舊培養(yang) 基，用PBS洗滌細胞1次。
  

• 加入胰蛋白酶（0.25%），37℃孵育1-2分鍾，待細胞輕輕拍打後脫落。

• 加入新鮮培養(yang) 基終止消化，將細胞懸液轉入離心管，以1000 rpm離心5分鍾。

• 棄去上清液，重懸細胞至新鮮培養(yang) 基中，按1:3-1:5比例接種至新的培養(yang) 瓶中。

• 培養(yang) 條件：37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中繼續培養(yang) ，2-3天換液一次。