
人原代心肌成纖維細胞
- 來源:心髒組織
- 細胞特征:貼壁細胞 , 成纖維細胞
- 培養(yang) 基:kaiyun网站安全專(zhuan) 用培養(yang) 基,含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
- 其他:活化狀態:在病理情況下,如心肌梗死和心力衰竭中,心肌成纖維細胞會(hui) 被激活,表現出增殖和ECM過度沉積的特征
人心肌成纖維細胞(human cardiac fibroblasts, hCF)是心髒組織中主要的非心肌細胞,約占非心肌細胞總數的90%,在心髒所有細胞中占比約為(wei) 70%。人心肌成纖維細胞來源於(yu) 胚胎時期的間充質細胞,形態上呈紡錘形或星形,細胞核卵圓,核仁明顯,細胞質嗜弱堿性,具有顯著的蛋白質合成與(yu) 分泌功能,可分泌膠原纖維、彈性纖維等基質成分。人原代心肌成纖維細胞通常來源於(yu) 流產(chan) 胎兒(er) 心髒組織、心髒手術獲取的組織,或通過細胞重編程技術從(cong) 其他體(ti) 細胞誘導獲得。
研究發現人原代心肌成纖維細胞不僅(jin) 在結構上支持心肌細胞,還通過自分泌和旁分泌功能調控心肌功能,尤其在心肌梗死、心髒纖維化等病理狀態下,心肌成纖維細胞的過度增殖和活化會(hui) 導致心髒結構的重塑,因此對其研究在心血管疾病領域具有重要意義(yi) 。
心肌成纖維細胞特性特征
貼壁能力:人心肌成纖維細胞呈圓形懸浮於(yu) 培養(yang) 基中,30分鍾後開始貼壁,並逐漸伸展成梭形或扁平狀;6小時後貼壁完成,細胞生長迅速,5-7天達到融合狀態。
增殖能力:作為(wei) 終末分化細胞,心肌成纖維細胞的增殖能力較弱,不建議進行擴增培養(yang) 。
生長狀態:細胞在生長過程中會(hui) 形成網狀結構,彼此連接,並且在一定條件下可以實現與(yu) 其他成纖維細胞的互相轉化。
心肌成纖維細胞在心髒中主要負責基質的合成與(yu) 分泌,為(wei) 心肌細胞提供結構支持,並在心髒損傷(shang) 時通過旁分泌因子參與(yu) 修複過程。
標誌性蛋白:心肌成纖維細胞通過免疫熒光染色可以檢測到纖維連接蛋白(Fibronectin)和波形蛋白(Vimentin),這些都是其典型的標誌性蛋白。
細胞質特性:細胞質呈弱堿性,具有明顯的蛋白質合成和分泌活動。
基因表達:心肌成纖維細胞表達多種與(yu) 細胞外基質合成相關(guan) 的基因,如膠原基因(COL1A1、COL3A1等),以及參與(yu) 信號傳(chuan) 導和生長因子合成的基因(如TGF-β)。
轉錄因子:心肌成纖維細胞中常見的轉錄因子包括SNAIL和SLUG,它們(men) 在調控細胞遷移和增殖中發揮重要作用
人原代心肌成纖維細胞參數表
細胞名稱 | 人原代心肌成纖維細胞(hCF) |
來源 | 正常人類心髒組織,主要為流產胎兒或心髒手術殘餘組織 |
細胞密度 | 通常接種密度為7000-10000個細胞/cm² |
細胞形態 | 長梭形或星形,具有明顯突起,細胞核卵圓形 |
細胞大小 | 直徑約15-30 μm |
培養基 | kaiyun网站安全專用培養基,含 FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin 等 |
培養溫度 | 37°C |
CO₂濃度 | 5% |
培養瓶規格 | T25:5 mL培養基;T75:15 mL培養基 |
傳代時機 | 當細胞融合率達到80%時進行傳代 |
更換培養基頻率 | 每2-3天更換一次 |
免疫標誌物 | Fibronectin、Vimentin陽性 |
基因表達 | 膠原基因(COL1A1、COL3A1等),TGF-β、PDGF等 |
轉錄因子 | SNAIL、SLUG |
合成與分泌 | 合成膠原纖維、彈性纖維、網狀纖維及有機基質 |
修複功能 | 在心肌損傷時產生旁分泌生長因子,促進組織修複 |
細胞質特性 | 嗜弱堿性,具有明顯的蛋白質合成和分泌活動 |
生長速率 | 通常在5-7天內達到融合狀態 |
細胞存活率 | 高於90% |
應用領域 | 心血管疾病機製研究、藥物篩選、再生醫學研究 |
培養教程
人原代心肌成纖維細胞培養教程
細胞培養
將分離得到的細胞懸液轉移至T25或T75細胞培養(yang) 瓶中,加入適量培養(yang) 基,確保人心肌成纖維細胞在貼壁初期具有充足的營養(yang) 。
置於(yu) 37°C、5% CO₂的培養(yang) 箱中,靜置30分鍾,促進人心肌成纖維細胞貼壁。
貼壁後6小時更換一次培養(yang) 基,以去除未附著的人心肌成纖維細胞和殘留的消化酶。
每2-3天更換培養(yang) 基,觀察人心肌成纖維細胞的形態和生長情況。
細胞傳代
人心肌成纖維細胞在5-7天內(nei) 通常可達80%-90%的融合狀態,準備進行傳(chuan) 代。
用PBS洗滌培養(yang) 瓶,以去除殘留培養(yang) 基,確保人心肌成纖維細胞不受雜質幹擾。
加入胰蛋白酶,37°C下處理2-5分鍾,觀察人心肌成纖維細胞逐漸脫落。
用含10% FBS的培養(yang) 基中和胰蛋白酶,收集人心肌成纖維細胞懸液,並離心(1000 rpm, 5分鍾)。
去除上清液,加入新鮮培養(yang) 基重懸人心肌成纖維細胞,按1:2或1:3比例進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
凍存
收集並計數人心肌成纖維細胞,調整濃度至1×10⁶-2×10⁶ cells/mL。
使用凍存液(90% FBS + 10% DMSO)重懸人心肌成纖維細胞,轉移至凍存管。
在-80°C降溫24小時後,將凍存管轉移至液氮中長期保存。
細胞複蘇
從(cong) 液氮中取出凍存管,37°C水浴快速融化。
將人心肌成纖維細胞懸液轉移至含培養(yang) 基的離心管中,離心去除DMSO。
用新鮮培養(yang) 基重懸細胞,轉移至培養(yang) 瓶中,置於(yu) 培養(yang) 箱內(nei) 繼續培養(yang) 。
注意事項
無菌操作:在培養(yang) 人心肌成纖維細胞的過程中,需嚴(yan) 格執行無菌操作,以防止細菌、真菌等汙染。
溫度和pH控製:確保培養(yang) 箱內(nei) 的溫度穩定在37°C,CO₂濃度保持在5%,定期監測培養(yang) 基的pH值(通常為(wei) 7.2-7.4),以維持人心肌成纖維細胞的正常生長。
細胞監測:定期觀察人心肌成纖維細胞的形態變化,及時更換培養(yang) 基,避免細胞過度融合影響實驗效果。
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