人肺成纖維細胞（kaiyun网站安全）

人肺成纖維細胞來源於(yu) 健康供體(ti) 或手術切除的正常肺組織，通過機械切割和酶解（如膠原酶處理）分離獲得，經純化後，其純度通常高於(yu) 90%，並通過波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色鑒定為(wei) 間充質細胞，安全性較高。

成纖維細胞具有紡錘形或星形的典型形態，細胞質透明且嗜弱堿性，核呈卵圓形，核仁顯著。剛分離的細胞呈圓形懸浮於(yu) 培養(yang) 基中，30分鍾內(nei) 開始貼壁並伸出偽(wei) 足，6小時後貼壁完全並展平成紡錘形，5-7天內(nei) 增殖至融合狀態，形成網狀結構。肺成纖維細胞在維持肺部組織結構、合成細胞外基質、修複組織損傷(shang) 中發揮重要作用，是研究肺纖維化、慢性阻塞性肺病等疾病的關(guan) 鍵工具，同時廣泛應用於(yu) 疾病機製研究、藥物篩選和再生醫學等領域。

人肺成纖維細胞特性特征

• 免疫標誌物：作為(wei) 間充質細胞的標誌物，人原代肺成纖維細胞在免疫熒光染色中對Vimentin呈陽性反應、纖維連接蛋白（Fibronectin）：表達陽性。

• 膠原蛋白：成纖維細胞能夠合成和分泌多種類型的膠原蛋白（如III型膠原），這是構建細胞外基質的重要組成部分。
  

• α-SMA（α平滑肌肌動蛋白）：在某些條件下，人肺成纖維細胞會(hui) 表達α-SMA，這與(yu) 其在組織修複和纖維化過程中的作用有關(guan) 。

• 成纖維細胞中與(yu) 膠原合成、細胞外基質重塑相關(guan) 的基因（如COL1A1、COL3A1等）通常高表達，這些基因在組織修複和重建中發揮重要作用。
  

• 在病理狀態下，例如肺纖維化，成纖維細胞會(hui) 表現出異常增殖和過度合成膠原蛋白，導致組織結構改變。

• 信號通路：成纖維細胞的活化與(yu) 多種信號通路相關(guan) ，包括TGF-β/Smad信號通路，該通路在調節細胞增殖、遷移和膠原合成中起關(guan) 鍵作用

人肺成纖維細胞參數表

原代人肺成纖維細胞培養教程

人肺成纖維細胞的複蘇步驟

• 從(cong) 液氮罐中迅速取出人肺成纖維細胞凍存管，立即置於(yu) 37°C水浴中輕輕搖晃解凍，過程控製在1-2分鍾內(nei) 。
  

• 將解凍的細胞轉入50ml離心管，加入5倍體(ti) 積的預溫培養(yang) 基稀釋後，以1000rpm離心5分鍾，棄去上清，去除DMSO等冷凍保護劑。
  

• 用新鮮培養(yang) 基重懸人肺成纖維細胞，將細胞移至培養(yang) 瓶中，初次培養(yang) 時建議低密度接種，培養(yang) 條件為(wei) 37°C、5% CO₂。

人肺成纖維細胞的傳代操作

• 當人肺成纖維細胞融合度達到80%以上時，通過顯微鏡確認細胞生長良好且無汙染，可以進行傳(chuan) 代操作。
  

• 洗滌：吸去舊培養(yang) 基，用PBS緩衝(chong) 液輕輕洗滌細胞以去除殘留血清。
  

• 胰酶消化：加入適量胰酶溶液覆蓋細胞，置於(yu) 37°C孵育2-5分鍾，直至人肺成纖維細胞開始變圓或脫落。

• 中和胰酶：用新鮮培養(yang) 基中止胰酶反應，輕輕吹打懸浮細胞。

• 離心與(yu) 重懸：以1000rpm離心5分鍾，棄去上清後，用培養(yang) 基重懸細胞，並按適當比例接種至新的培養(yang) 瓶中。

人肺成纖維細胞的日常維護

• 每日通過顯微鏡觀察人肺成纖維細胞的形態和生長狀態，記錄任何異常現象如細胞脫落、變色或汙染等情況。
  

• 每2-3天更換一次培養(yang) 基，確保人肺成纖維細胞有充足營養(yang) ，並去除代謝廢物。
  

• 定期檢查培養(yang) 箱的溫度、濕度和CO₂濃度，確保人肺成纖維細胞生長環境維持在37°C、95%濕度和5% CO₂條件下。