大鼠原代肺成纖維細胞

大鼠原代肺成纖維細胞（RPLF）來源於(yu) 大鼠的正常肺組織，尤其是肺動脈外膜區域，通常從(cong) 新生或成年大鼠的肺部取材。成纖維細胞是疏鬆結締組織的主要成分，起源於(yu) 胚胎時期的間充質細胞，形態通常為(wei) 大而輪廓清晰的紡錘形或星形，細胞質呈弱堿性，具有顯著的蛋白質合成與(yu) 分泌功能，在組織修複、炎症反應及纖維化過程中起著關(guan) 鍵作用。肺成纖維細胞主要負責合成和維持細胞外基質，參與(yu) 組織的修複和重建。大鼠原代肺成纖維細胞在維持肺器官結構、修複損傷(shang) 及氣道重塑等過程中具有重要作用，是研究肺纖維化等疾病的關(guan) 鍵模型。

大鼠原代肺成纖維細胞特性特征

• 標誌物：免疫熒光染色可檢測到波形蛋白（Vimentin）和纖維連接蛋白（Fibronectin）等特征性標誌物。

• 功能活性：成纖維細胞具有強烈的蛋白質合成和分泌能力，能夠合成和釋放細胞外基質成分，如III型膠原、彈性蛋白及蛋白多糖。這些功能在組織損傷(shang) 後尤為(wei) 重要，能夠促進修複和重建。
  

• 對刺激的反應：在轉化生長因子-β1（TGF-β1）等刺激下，大鼠原代肺成纖維細胞表現出增殖能力的增強，並參與(yu) 肺部的炎症反應和修複過程。

• 基因表達：在TGF-β1刺激下，肺成纖維細胞中周期蛋白依賴性激酶-2（CDK2）的表達增加，而抑製因子p27的表達降低。這一變化與(yu) 細胞周期的調控及增殖密切相關(guan) 。
  

大鼠原代肺成纖維細胞參數表

大鼠原代肺成纖維細胞培養教程

細胞複蘇

• 配製完全培養(yang) 基：根據需要配製完全培養(yang) 基，確保基礎培養(yang) 基中添加適量的胎牛血清和抗生素（如青黴素/鏈黴素）。

• 細胞解凍：從(cong) 液氮罐或-80℃冰箱中取出凍存的肺成纖維細胞管，迅速放入37℃水浴鍋中，輕輕搖晃解凍，約1分鍾即可完全解凍。

• 離心處理：解凍後，將細胞懸液轉移到預熱的15 ml離心管中，加入5 ml完全培養(yang) 基，進行1000 rpm離心5分鍾，去除上清液。

• 重懸細胞：吸棄上清液後，用2 ml完全培養(yang) 基重懸肺成纖維細胞。

• 接種細胞：將重懸的肺成纖維細胞轉移到T25培養(yang) 瓶中，並做好標記。將培養(yang) 瓶放入37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中，繼續培養(yang) 。

• 觀察細胞貼壁情況：24小時後觀察肺成纖維細胞是否順利貼壁。如有未貼壁的細胞，吸棄舊培養(yang) 基，加入新鮮預熱的完全培養(yang) 基繼續培養(yang) ，確保細胞完全貼壁。

細胞傳代

• 待肺成纖維細胞生長至80%-90%匯合度時，準備進行傳(chuan) 代。
  

• 洗滌細胞：吸棄舊的培養(yang) 基，加入1 ml無菌PBS潤洗一次，去除殘餘(yu) 的培養(yang) 基和血清。

• 消化處理：加入1 ml 0.25%胰酶，放入37℃培養(yang) 箱消化1-2分鍾，直至肺成纖維細胞開始皺縮、變圓。

• 終止消化：加入1 ml完全培養(yang) 基終止消化反應，用輕拍方式使細胞脫落，並將細胞收集到無菌15 ml離心管中。

• 離心與(yu) 重懸：進行1000 rpm離心5分鍾，收集細胞沉澱，用完全培養(yang) 基重懸肺成纖維細胞。根據細胞生長情況，可調整分裝比例，通常1:3或1:4進行分瓶。

• 繼續培養(yang) ：將新的培養(yang) 瓶放入37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中，繼續培養(yang) 。

細胞凍存

• 收集細胞：按照傳(chuan) 代方法收集肺成纖維細胞沉澱，取少量細胞用於(yu) 計數。

• 重懸細胞：使用預冷的凍存液（90%完全培養(yang) 基 + 10% DMSO）重懸細胞，確保細胞濃度為(wei) 1×10^6個(ge) /ml。

• 分裝凍存：將細胞懸液分裝到1.2 ml凍存管中，做好標記，確保凍存管上標明細胞信息（如細胞係、凍存日期等）。

• 程序凍存：將凍存管放入程序凍存盒中，在-80℃的冰箱中過夜，隨後轉移至液氮罐中進行長期保存。

細胞培養小貼士

• 完全培養(yang) 基的配製：常用的完全培養(yang) 基為(wei) DMEM或RPMI-1640，加入胎牛血清（10%）和抗生素（如青黴素和鏈黴素）。

• 胰酶消化時間：不同細胞類型和生長狀態可能需要不同的消化時間，一般為(wei) 1-2分鍾，觀察細胞形態，避免過度消化。

• 凍存液：DMSO是一種常用的凍存保護劑，可以有效保護細胞在凍存過程中免受冰晶損傷(shang) 。重懸細胞時要確保凍存液預冷，以提高細胞存活率。