大鼠肺動脈成纖維細胞（kaiyun网站安全）

大鼠肺動脈成纖維細胞（Rat Pulmonary Artery Fibroblasts, RPAFs）是從(cong) 大鼠肺動脈外膜組織中分離並培養(yang) 的細胞，主要呈長梭形或星形，貼壁生長，細胞核為(wei) 卵圓形，核仁明顯，細胞質透明且呈弱堿性，初次分離時懸浮於(yu) 培養(yang) 基中，貼壁後逐漸伸展成梭形並分布均勻，融合後形成網狀結構。

肺動脈成纖維細胞是肺間質中數量最多的細胞類型，主要功能包括合成和分泌細胞外基質（如膠原蛋白和彈性蛋白）、維持肺動脈結構的完整性及在組織損傷(shang) 時參與(yu) 修複過程。在培養(yang) 條件下，細胞生長迅速，5-7天可達到融合狀態，具有顯著的蛋白質合成與(yu) 分泌能力。大鼠肺動脈成纖維細胞在研究肺動脈結構和功能、組織修複以及肺動脈相關(guan) 疾病的分子機製方麵具有重要的應用價(jia) 值。

大鼠肺動脈成纖維細胞特性特征

• 標誌物表達：成纖維細胞表達波形蛋白（Vimentin）和α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA），後者在轉化為(wei) 肌成纖維細胞時顯著增加。

• 細胞外基質合成：主要合成和分泌膠原蛋白、彈性蛋白等細胞外基質成分，對維持肺動脈的結構和功能至關(guan) 重要。

• 成纖維細胞的基因表達譜顯示其具備較強的增殖能力和修複能力，相關(guan) 基因包括：膠原蛋白基因：如COL1A1、COL3A1等。生長因子受體(ti) ：如TGF-β受體(ti) ，與(yu) 組織修複和纖維化過程相關(guan)

大鼠肺動脈成纖維細胞參數表

原代大鼠肺動脈成纖維細胞培養教程

細胞複蘇

• 解凍細胞：將凍存管迅速放入37℃的水浴中，並輕輕搖晃，使肺動脈成纖維細胞在1-2分鍾內(nei) 完全解凍。

• 稀釋培養(yang) ：將解凍後的細胞立即加入4 mL含有10%胎牛血清的低糖DMEM培養(yang) 基中，輕輕混勻。

• 離心去雜：將混合液轉移至15 mL離心管中，以1000 RPM離心4分鍾，棄去上清液，保留細胞沉澱。

• 重懸與(yu) 培養(yang) ：用1-2 mL新鮮培養(yang) 基重懸肺動脈成纖維細胞，並轉移至培養(yang) 瓶中（如T25瓶）。加入適量培養(yang) 基（約5 mL），置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中過夜培養(yang) 。

• 換液操作：次日觀察細胞貼壁狀態，棄去舊培養(yang) 基，更換新鮮培養(yang) 基。

細胞傳代

• 傳(chuan) 代時機判斷：當肺動脈成纖維細胞生長達到80%-90%融合時，可進行傳(chuan) 代操作。

• 洗滌細胞：棄去培養(yang) 液，用PBS溶液輕輕洗滌細胞一次，去除殘餘(yu) 培養(yang) 基。

• 細胞消化：加入1.5 mL 0.125%胰酶溶液，37℃孵育1-3分鍾，待肺動脈成纖維細胞開始變圓、輕微脫落時，立即終止消化。

• 終止消化與(yu) 收集：加入適量含10%胎牛血清的培養(yang) 基終止消化，並輕輕吹打使細胞完全脫落。

• 離心與(yu) 重懸：將細胞懸液轉入離心管，以1000 RPM離心5分鍾，棄去上清液後，用新鮮培養(yang) 基重懸細胞。

• 接種與(yu) 培養(yang) ：按1:2或1:3比例接種肺動脈成纖維細胞至新培養(yang) 瓶中，加入適量培養(yang) 基，置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 。

細胞凍存

• 細胞收集：按上述傳(chuan) 代步驟消化並收集肺動脈成纖維細胞，離心去除培養(yang) 基。

• 製備凍存液：用含10% DMSO和90%胎牛血清的凍存液重懸細胞，使濃度保持在1×10⁶至5×10⁶個(ge) 細胞/mL。

• 凍存分裝：將肺動脈成纖維細胞懸液分裝至凍存管中，每管500 μL至1 mL。

• 緩慢冷凍：將凍存管放入程序降溫盒中，置於(yu) -80℃冰箱中過夜，確保肺動脈成纖維細胞的冷凍過程緩慢且均勻。

• 長期保存：次日將凍存管轉移至液氮儲(chu) 存罐中，進行長期保存。

注意事項

• 細胞狀態監測：確保肺動脈成纖維細胞始終保持良好的貼壁狀態，避免過度消化或過密培養(yang) 。

• 無菌操作：複蘇、傳(chuan) 代和凍存過程中需嚴(yan) 格遵循無菌操作規範，防止細胞汙染。

• 培養(yang) 基更換：定期更換培養(yang) 基，通常每2-3天換液一次，以確保肺動脈成纖維細胞處於(yu) 最佳生長狀態。