MOVAS細胞（小鼠主動脈血管平滑肌細胞）

MOVAS細胞（小鼠主動脈血管平滑肌細胞）是一種紡錘形細胞係，於(yu) 1999年首次從(cong) 成年小鼠的主動脈平滑肌中分離。通過膠原酶和彈性蛋白酶的消化處理，分離得到的原代血管平滑肌細胞，然後用編碼SV40大T抗原和新黴素抗性基因的逆轉錄病毒進行轉染。轉染後的細胞在含有0.4 mg/ml G418的培養(yang) 基中進行克隆選擇，並通過限製稀釋法獲得亞(ya) 克隆。MOVAS細胞係廣泛應用於(yu) 心血管疾病研究。

MOVAS細胞特性特征

• 基因表達：肌動蛋白，α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、Calponin 1、德斯敏(Desmin)、平滑肌蛋白22

• 遺傳(chuan) 特征：含有SV40大T抗原基因、攜帶新黴素抗性基因

• α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫熒光染色呈陽性、細胞純度高於(yu) 90%

• 永生化特征：通過SV40大T抗原轉化實現永生化

MOVAS細胞參數表

MOVAS小鼠主動脈血管平滑肌細胞培養教程

MOVAS細胞的傳代步驟

• 吸幹MOVAS細胞的原培養(yang) 基。

• 使用3-4 mL常溫PBS輕輕潤洗MOVAS細胞，持續10-20秒，然後吸走潤洗的PBS。

• 加入1 mL胰酶，輕輕晃動培養(yang) 瓶使胰酶均勻覆蓋MOVAS細胞層。

• 將培養(yang) 瓶放入37℃培養(yang) 箱中消化，觀察MOVAS細胞間隙的變化。

• 當MOVAS細胞間隙增大但未完全脫落時，加入2-3 mL完全培養(yang) 基以終止消化。

• 混勻MOVAS細胞後，以900 RPM離心3-5分鍾，棄去上清液。

• 加入新的完全培養(yang) 基輕輕重懸MOVAS細胞，均勻分配到新培養(yang) 瓶中。

• 補足完全培養(yang) 基，放回培養(yang) 箱靜置培養(yang) MOVAS細胞。

MOVAS細胞培養的注意事項

• 不同品牌的胰酶消化時間可能有所不同，需根據MOVAS細胞狀態嚴(yan) 格控製消化時間。

• 消化傳(chuan) 代MOVAS細胞時，吹打細胞要輕柔，避免產(chan) 生過多氣泡。

MOVAS細胞的凍存步驟

• 凍存規格：每管凍存200-300萬(wan) MOVAS細胞/mL，體(ti) 積為(wei) 1 mL。

• 消化並離心獲得MOVAS細胞沉澱後，加入凍存液輕輕重懸MOVAS細胞。

• 將MOVAS細胞懸液移入標記好的凍存管。

• 轉入程序凍存盒，放入-80℃冰箱過夜，第二天轉入液氮保存MOVAS細胞。

MOVAS細胞的複蘇步驟

• 解凍：將MOVAS細胞凍存管在37℃水浴中迅速解凍。

• 混合：加入5 mL培養(yang) 基，輕輕混合均勻MOVAS細胞。

• 離心：以1000 RPM離心5分鍾，棄去上清液。

• 補加培養(yang) 基：補加4-6 mL完全培養(yang) 基。

MOVAS細胞的培養基配方對其影響

• 培養(yang) 基配方對MOVAS細胞的增殖速度和基因表達有顯著影響。標準配方通常包括DMEM + 10% FBS + 1% P/S + 0.2 mg/mL G418。這個(ge) 配方中的胎牛血清提供生長因子和營養(yang) 物質，直接影響MOVAS細胞增殖速度。G418作為(wei) 選擇性抗生素，維持MOVAS細胞的遺傳(chuan) 穩定性。調整培養(yang) 基配方可能影響MOVAS細胞的生長狀態和基因表達，特別是對平滑肌α-肌動蛋白、Calponin 1、德斯敏和平滑肌蛋白22等標誌性基因的表達水平。因此，在進行基因表達相關(guan) 研究時，需要保持培養(yang) 條件的一致性，並考慮培養(yang) 基配方可能帶來的影響。