
人臍帶血內(nei) 皮祖細胞(原代內(nei) 皮祖細胞)
- 來源:臍帶血
- 細胞特征:貼壁細胞 , 內(nei) 皮細胞樣
- 培養(yang) 基:kaiyun网站安全專(zhuan) 用培養(yang) 基
- 其他:EPCs細胞在不同培養(yang) 階段表現出不同的基因表達模式,早期EPCs與(yu) 晚期EPCs在功能和增殖能力上存在明顯差異
人臍帶血內(nei) 皮祖細胞(Endothelial Progenitor Cells, EPCs)是一類源自臍帶血的重要幹細胞。臍帶血是胎兒(er) 分娩後,臍帶結紮並切斷時所殘留在臍帶和胎盤中的血液。臍帶血不僅(jin) 富含造血幹細胞,也包含大量內(nei) 皮祖細胞,這些細胞具備自我更新、高度增殖以及多向分化的潛能,可以用於(yu) 重建造血和免疫係統。
內(nei) 皮祖細胞是指未成熟的細胞群體(ti) ,能夠分化為(wei) 成熟的內(nei) 皮細胞。主要參與(yu) 新血管的生成以及損傷(shang) 血管的修複過程。臍帶血內(nei) 皮祖細胞具有從(cong) 骨髓遷移至外周血的能力,並能夠在生理或病理條件下促進血管生成和血管修複。在組織損傷(shang) 或缺血性疾病的修複中,EPCs發揮了關(guan) 鍵作用,並為(wei) 血管生成相關(guan) 疾病提供了新的治療思路。
由於(yu) 臍帶血采集過程無創且相對簡單,因此成為(wei) 了獲取EPCs的理想來源。相較於(yu) 骨髓,臍帶血中內(nei) 皮祖細胞的含量較高,且其增殖能力更強,這使其在臨(lin) 床應用中具有獨特的優(you) 勢。臍帶血內(nei) 皮祖細胞在治療心腦血管疾病、腫瘤相關(guan) 血管生成、創傷(shang) 愈合及其他缺血性疾病中具有廣泛的應用,為(wei) 血管修複和再生醫學提供了新的方向,推動了相關(guan) 疾病治療的臨(lin) 床轉化。
人臍帶血內皮祖細胞特性特征
表麵標記物:EPCs細胞通常表達表麵標記物,CD34、CD133、VEGFR2(血管內(nei) 皮生長因子受體(ti) 2)和CD31等。
缺乏成熟內(nei) 皮細胞標記:與(yu) 成熟內(nei) 皮細胞相比,EPCs缺乏某些特征性表型,不能形成管腔樣結構,表現為(wei) 幼稚內(nei) 皮細胞的特征。
自我更新與(yu) 增殖能力:臍帶血內(nei) 皮祖細胞具有自我更新的能力,能夠通過分裂維持自身數量,並在適當條件下進行增殖。
多向分化潛能:EPCs細胞能夠向成熟內(nei) 皮細胞、平滑肌細胞、成骨細胞等多種細胞類型分化,參與(yu) 組織修複和再生。
細胞形態:EPCs細胞在體(ti) 外培養(yang) 初期呈長梭狀,隨著培養(yang) 時間的延長,可能會(hui) 變為(wei) 鵝卵石樣或鋪路石樣形態。
血管生成:EPCs細胞在血管損傷(shang) 後能夠動員至受損部位,促進新血管的形成和修複,對心腦血管疾病、外周血管疾病及創傷(shang) 愈合等具有重要作用。
分泌生長因子:EPCs細胞能夠分泌多種生長因子,如VEGF和IL-8,這些因子在血管生成過程中起到重要的促進作用
人臍帶血內皮祖細胞參數表
細胞名稱 | 人臍帶血內皮祖細胞(原代內皮祖細胞) |
來源 | 人臍帶血 |
細胞類型 | 內皮祖細胞(EPCs) |
細胞形態 | 長梭狀或不規則形狀 |
表麵標記物 | CD34, CD133, VEGFR2, CD31 |
自我更新能力 | 是 |
多向分化潛能 | 是 |
培養基 | kaiyun网站安全專用培養基,含 FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin 等 |
培養溫度 | 37℃ |
CO₂濃度 | 5% |
培養時間 | 5-10天(通常8天) |
傳代比例 | 1:2至1:6 |
細胞密度 | 80%-90%時進行傳代 |
消化方式 | 0.25%胰蛋白酶 |
離心速度 | 1000 RPM |
離心時間 | 4分鍾 |
凍存液 | 90% 完全培養基 + 10% DMSO |
程控降溫速率 | 每小時約1℃ |
凍存溫度 | -80℃ |
長期保存溫度 | 液氮(-196℃) |
分離方法 | 密度梯度離心法 |
鑒定方法 | 流式細胞術、免疫熒光染色、免疫組織化學檢測 |
生長因子添加 | VEGF、FGF、EGF等 |
胎球蛋白濃度 | 1 mg/mL(可選範圍0.5-5 mg/mL) |
功能特性 | 參與血管生成與修複 |
培養教程
原代人臍帶血來源內皮祖細胞培養教程
細胞複蘇
從(cong) 液氮中迅速取出凍存管,並立即將其放入37°C水浴中,輕輕搖晃以加速解凍過程。
解凍完成後,迅速加入4 mL完全培養(yang) 基(例如EGM-2)進行稀釋,幫助去除DMSO。
將內(nei) 皮祖細胞懸液轉移至離心管,按照1000 RPM離心4分鍾,去除上清液並保留細胞沉澱。
向內(nei) 皮祖細胞沉澱中加入1-2 mL完全培養(yang) 基,輕輕吹打混勻,使細胞均勻分散。
將重懸的內(nei) 皮祖細胞懸液移至預先包被人纖維連接蛋白的培養(yang) 瓶(如T25或6孔板),然後放置於(yu) 37°C、5% CO₂的培養(yang) 箱中培養(yang) 過夜,促進細胞附著。
細胞傳代
當內(nei) 皮祖細胞的密度達到80%-90%時,表明細胞已接近滿培養(yang) 瓶,可以進行傳(chuan) 代操作。
用0.25%胰蛋白酶消化內(nei) 皮祖細胞。將胰蛋白酶加入培養(yang) 瓶內(nei) ,輕輕搖動以確保均勻覆蓋。消化時間控製在2-5分鍾,確保細胞完全從(cong) 培養(yang) 表麵脫落。
通過加入等體(ti) 積的完全培養(yang) 基來終止胰蛋白酶的消化反應。
將內(nei) 皮祖細胞轉移至離心管中,以1000 RPM離心4分鍾,去除上清液後,用適量的完全培養(yang) 基重懸細胞,並根據需要調整細胞濃度。
將重懸後的內(nei) 皮祖細胞接種到新的培養(yang) 瓶中,通常傳(chuan) 代比例為(wei) 1:2至1:6。接種後將細胞放置在37°C、5% CO₂的培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。
凍存
配製凍存液,通常為(wei) 90%完全培養(yang) 基與(yu) 10% DMSO的混合液體(ti) ,以確保內(nei) 皮祖細胞在凍存過程中免受冷凍損傷(shang) 。
重懸細胞:將內(nei) 皮祖細胞按適當濃度重懸在凍存液中,確保細胞均勻分布。
分裝凍存管:將細胞懸液分裝至凍存管中,每管約1 mL。
程控降溫:使用程控降溫設備將凍存管放入設備中,按照每小時約1°C的速度降溫至-80°C,確保細胞在凍存過程中均勻降溫。
液氮保存:在-80°C下保持24小時後,將凍存管轉移至液氮中儲(chu) 存,以長期保存內(nei) 皮祖細胞。