人視網膜微血管內(nei) 皮細胞（HRCEC細胞、kaiyun网站安全）

人視網膜微血管內(nei) 皮細胞（HRCEC）來源於(yu) 人眼視網膜組織的，廣泛應用於(yu) 研究視網膜血管性疾病。HRCEC細胞用於(yu) 研究糖尿病性視網膜病變、年齡相關(guan) 性黃斑變性等視網膜疾病。

HRCEC人視網膜微血管內皮細胞特性

• 來源於(yu) 正常眼組織，細胞純度高，穩定性強。

• 細胞純度高於(yu) 90%。

• 免疫熒光染色鑒定顯示，細胞陽性表達血小板-內(nei) 皮細胞粘附分子（PECAM-1/CD31）和血管假性血友病因子（vWF）。

• hrcec細胞生長呈鵝卵石狀，貼壁培養(yang) 。

• 在體(ti) 外培養(yang) 條件下，HRCEC具有較好的增殖能力，每周可傳(chuan) 代2-3次。

• HRCEC可作為(wei) 體(ti) 外模型。

HRCEC人視網膜微血管內皮細胞參數表

人視網膜微血管內皮細胞（HRCEC）培養教程

培養準備

• 培養(yang) 基配置： 基礎培養(yang) 基 500mL，生長添加劑 5mL，胎牛血清 25mL，雙抗 5mL。

• 存儲(chu) 條件： 內(nei) 皮細胞基礎培養(yang) 基：4℃、避光；內(nei) 皮細胞培養(yang) 添加劑：-20℃、避光；胎牛血清（FBS）

細胞複蘇

1.1 離心法

• 準備一個(ge) T25 的細胞培養(yang) 瓶並做好標記，預熱好的細胞完全培養(yang) 基，一支 15ml 離心管，離心管中加入 4-5ml 細胞完全培養(yang) 基。

• 取出hrcec細胞凍存管，在 37 度水浴中快速解凍，將管子擦幹並消毒後迅速拿回生物安全櫃。

• 將細胞懸液轉移到加有培養(yang) 基的離心管中，進行 1000 轉離心 5 分鍾。

• 倒掉上清，加入培養(yang) 基輕輕重懸細胞，亦可先將細胞團彈散後加入培養(yang) 基混勻。

• 將重懸好的細胞轉移到 T25 細胞培養(yang) 瓶，補充培養(yang) 基到 8ml 左右，十字搖晃，將細胞鋪勻後放入培養(yang) 箱培養(yang) 。

1.2 不離心法

• 準備一個(ge) T25 的細胞培養(yang) 瓶並做好標記，預熱好的細胞完全培養(yang) 基，培養(yang) 瓶中加入 8ml 左右培養(yang) 基。

• 取出細胞凍存管，在 37 度水浴中快速解凍，將管子擦幹並消毒後迅速拿回生物安全櫃。

• 將細胞懸液轉移到加有培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中，十字搖晃，將細胞鋪勻後放入培養(yang) 箱培養(yang) ，接種 16 小時後更換培養(yang) 基。

2. 細胞傳代

• 準備細胞完全培養(yang) 基、細胞培養(yang) 瓶、胰酶（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA）、DPBS。

• 棄去上清，並加入 2-3ml DPBS 輕柔衝(chong) 洗培養(yang) 瓶內(nei) 細胞 1-2 次。

• 加入 1ml 胰酶，室溫或者 37 度消化，直到細胞成片脫落，加入 3-4ml 完全培養(yang) 基終止消化，如果有成團塊脫落的細胞可輕輕吹打分散細胞後再終止消化。

• 收集細胞懸液，進行 1000 轉離心 5 分鍾，棄去上清，加入培養(yang) 基輕輕重懸細胞，亦可先將細胞團彈散後加入培養(yang) 基混勻。

• 將重懸好的細胞按比例分裝至 T25 細胞培養(yang) 瓶，補充培養(yang) 基到 8ml 左右，十字搖晃，將細胞鋪勻後放入培養(yang) 箱培養(yang) 。

3. 細胞凍存

• 準備細胞凍存液、細胞凍存管、胰酶（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA）、DPBS。

• 棄去上清，並加入 2-3ml DPBS 輕柔衝(chong) 洗培養(yang) 瓶內(nei) 細胞 1-2 次。

• 加入 1ml 胰酶，室溫或者 37 度消化，直到細胞成片脫落，加入完全培養(yang) 基終止消化，如果有成團塊脫落的細胞可輕輕吹打分散細胞後再終止消化。

• 收集細胞懸液，進行 1000 轉離心 5 分鍾，棄去上清。

• 加入凍存液，重懸細胞，並分裝到凍存管，凍存密度 0.8-1.5×106 細胞/ml。

• 將凍存管放入程序降溫盒，並放到-80℃冰箱，過夜後將凍存管轉移到液氮保存。