原代大鼠視網膜微血管內(nei) 皮細胞

大鼠視網膜微血管內(nei) 皮細胞來源於(yu) 成年大鼠視網膜組織，經過分離培養(yang) 獲得，具有高純度，不含有多種病原體(ti) 。視網膜是由血管腔麵單層扁平上皮樣細胞組成，其產(chan) 生的生物活性物質對維持血管張力、調節血壓、抗血栓形成等具有重要作用。

視網膜及微血管內皮細胞特性

• 視網膜是眼球壁內(nei) 層的透明薄膜，視網膜分為(wei) 色素上皮層和感覺層，色素上皮層與(yu) 脈絡膜相連，支持和營養(yang) 光感受器細胞。

• 視網膜組織學上分為(wei) 10層，包括色素上皮層、視錐、視杆細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢(cong) 狀層、內(nei) 顆粒層、內(nei) 叢(cong) 狀層、神經節細胞層、神經纖維層和內(nei) 界膜。

• 視網膜內(nei) 層有感光作用。視網膜上的感覺層由三個(ge) 神經元組成，分別是視細胞層、雙節細胞層和節細胞層。

• 視網膜是血管腔麵單層扁平上皮樣細胞的組成，其產(chan) 生的生物活性物質對維持血管張力、調節血壓、抗血栓形成等起重要作用。

• 視網膜血管內(nei) 皮細胞在視網膜血管疾病的發病機製中具有重要的病理生理學意義(yi) 。

大鼠視網膜微血管內皮細胞參數表

大鼠視網膜微血管內皮細胞培養

細胞穩定

• 取出25cm²培養(yang) 瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO₂、飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置6-8小時或過夜，以穩定細胞狀態。

細胞傳代

• 吸出25cm²培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基，用PBS清洗細胞一次。

• 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yang) 瓶中，37℃溫浴3分鍾左右，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓後吸棄消化液，再加入完全培養(yang) 液終止消化。

• 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3的比例進行接種傳(chuan) 代，然後補充新鮮的完全培養(yang) 基至5mL，放入37℃、5%CO₂細胞培養(yang) 箱中培養(yang) 。

• 待細胞完全貼壁後，培養(yang) 觀察，之後每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yang) 基。

貼壁細胞消化

• 吸出T25細胞培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基，用PBS清洗細胞一次。

• 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yang) 瓶中，輕微轉動培養(yang) 瓶以覆蓋整個(ge) 瓶底後，吸出多餘(yu) 消化液，37℃溫浴1-3分鍾。顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓後，再加入5mL完全培養(yang) 基終止消化。

• 用吸管輕輕吹打混勻，按傳(chuan) 代比例接種T25培養(yang) 瓶傳(chuan) 代，然後補充新鮮的完全培養(yang) 基至5mL，置於(yu) 37℃、5%CO₂、飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置培養(yang) 。

• 待細胞完全貼壁後，培養(yang) 觀察，之後按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yang) 基。

細胞收貨脫落

• 收集所有細胞懸液，1000rpm離心5分鍾，保留沉澱。

• 添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉澱，放置於(yu) 37℃消化3分鍾（或4℃冰箱靜置5-7分鍾）。消化完後向離心管內(nei) 加入5mL完全培養(yang) 基終止消化。

• 經1000rpm離心5分鍾，丟(diu) 棄上清，用5mL完全培養(yang) 基（補加1%FBS，促進貼壁）重懸沉澱，接種於(yu) 新的培養(yang) 瓶內(nei) 。

• 待細胞完全貼壁後，培養(yang) 觀察，之後按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yang) 基（37℃預熱）。

細胞實驗

• kaiyun网站安全貼壁特殊，消化後轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yang) 板、共聚焦培養(yang) 皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免因貼壁不良影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm²）、多聚賴氨酸PLL（0.1mg/mL）、明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

注意事項

• 培養(yang) 基在4℃條件下可保存3-6個(ge) 月。

• 在細胞培養(yang) 過程中，請注意保持無菌操作。

• 傳(chuan) 代培養(yang) 過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會(hui) 影響細胞貼壁及其生長狀態。