661W細胞（小鼠視網膜神經節細胞）

661W細胞係來源於(yu) 雄性C57BL/6N轉基因小鼠的視網膜組織，屬於(yu) 視網膜神經節細胞類型，並帶有SV40病毒基因。661W感光細胞係由視網膜錐細胞轉化而成，具備視錐細胞的標記物，是研究視網膜及睫狀體(ti) 疾病的有效細胞模型。

661W細胞特性特征

• 轉基因特性: 攜帶SV40基因，這是使661W細胞永生化的關(guan) 鍵因素。
  

• 視錐細胞標記: 661W細胞表達視錐細胞特有的分子標記，使其成為(wei) 研究視網膜光感受器的理想模型。

• 光感受性: 661W細胞作為(wei) 視網膜感光細胞，對光刺激有反應。

• 低氧敏感性: 661W細胞在低氧條件下會(hui) 發生時間依賴性死亡。

661W小鼠視網膜神經節細胞參數表

661W小鼠視網膜神經節細胞培養教程

傳代步驟

• 吸幹T25瓶中的原培養(yang) 基。

• 用3-4ml常溫PBS輕輕衝(chong) 洗661W細胞10-20秒，隨後吸走PBS。

• 加入約1ml胰酶，輕輕晃動培養(yang) 瓶使胰酶均勻覆蓋在661W細胞層上。

• 將培養(yang) 瓶放入37℃培養(yang) 箱中消化，觀察661W細胞間隙變化。

• 當細胞間隙增大但未完全脫落時，加入2-3ml完全培養(yang) 基終止消化。

• 將661W細胞懸液混勻，900rpm離心3-5分鍾，棄上清液。

• 用新鮮完全培養(yang) 基輕輕重懸661W細胞，均勻分配至新培養(yang) 瓶中。

• 補足完全培養(yang) 基，將培養(yang) 瓶放回培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 661W細胞。

凍存方法

• 凍存液配方: 92% FBS + 8% DMSO（推薦給新手）或92%完全培養(yang) 基 + 8% DMSO（推薦給有經驗者）

• 凍存規格: 200-300萬(wan) 661W細胞/ml，1ml每管

• 消化並離心後，加入配製好的凍存液輕輕重懸661W細胞。

• 將661W細胞懸液迅速轉移至標記好的凍存管中。

• 將凍存管放入程序凍存盒中，置於(yu) -80℃冰箱過夜，次日轉入液氮中保存。

• 若無程序凍存盒，可將凍存管放在泡沫盒中於(yu) 4℃靜置5-10分鍾，再於(yu) -20℃靜置2小時後轉入-80℃冰箱過夜，次日轉入液氮保存。

注意事項

• 消化控製: 不同品牌的胰酶消化時間差異較大，需嚴(yan) 格控製消化時間以避免對661W細胞的過度損傷(shang) 。

• 操作要求: 傳(chuan) 代操作時需輕柔，避免產(chan) 生過多氣泡。

• 質量控製: 凍存後應及時複蘇一管661W細胞以檢查細胞活性，並定期監測661W細胞狀態以確保其未發生變異或汙染。

• 實驗設計: 由於(yu) 661W細胞對低氧條件的敏感性，設計相關(guan) 實驗時需考慮低氧對661W細胞生物學特性的影響。

低氧條件下的生長特性

• 基因表達和信號通路:低氧條件下（1% O2和5% CO2）與(yu) 常氧條件下（5% CO2）相比，661W細胞的基因表達和信號通路發生顯著變化。篩選出506個(ge) 顯著差異表達基因，其中459個(ge) 基因上調，47個(ge) 基因下調。主要涉及細胞對低氧反應、糖酵解、細胞增生負調控及凋亡等過程。

• 主要信號通路包括糖酵解、糖異生、果糖代謝、磷酸戊糖途徑、HIF-1α、FoxO、胰島素及AMPK信號通路。

• 關(guan) 鍵低氧相關(guan) 基因包括Aldoa、Aldoc、Gpi1、Hk2、Hk1、Pfkl、Pfkp、Vhl、Fbxo10、Fbxo27，以及Ndrg1、Mt1和VEGFA的mRNA表達水平呈低氧時間依賴性變化。

  
  

• 細胞行為(wei)

• 凋亡: 低氧條件下，661W細胞的凋亡率顯著增加。

• 自噬: 缺氧後自噬水平升高，8小時後達到峰值。

• 糖代謝: 低氧條件下，糖酵解相關(guan) 基因顯著上調，表明661W細胞通過增強糖酵解途徑應對低氧環境。

傳代比例下的表現

• 傳(chuan) 代比例影響:

• 1:2: 適用於(yu) 661W細胞生長較快的情況，細胞密度適中，生長狀態良好。

• 1:4: 適用於(yu) 661W細胞生長較慢的情況，傳(chuan) 代比例較高時細胞密度較低，可能需要更長時間達到適宜的細胞密度。

  
  

  
  

• 注意事項:

• 不同品牌胰酶消化時間差異較大，需嚴(yan) 格控製消化時間。

• 傳(chuan) 代時需輕柔操作，避免產(chan) 生氣泡。

• 定期監測661W細胞生長狀態，確保細胞未發生變異或汙染。