小鼠視網膜muller細胞（kaiyun网站安全）

小鼠視網膜Müller細胞是視網膜中的放射狀神經膠質細胞，貫穿視網膜的各個(ge) 層次，在結構和功能維持中發揮著至關(guan) 重要的作用。

小鼠視網膜Muller細胞主要通過從(cong) 實驗小鼠的視網膜組織中分離獲得，常用的分離方法包括膠原酶或胰蛋白酶消化法，分離後細胞呈長梭形，貼壁生長，純度可達90%以上。Müller細胞在視網膜中不僅(jin) 起到支撐和維持血-視網膜屏障的作用，還參與(yu) 神經元代謝、離子濃度調控和病理損傷(shang) 響應，尤其在增生性玻璃體(ti) 視網膜病變及糖尿病視網膜病變等疾病中具有重要作用。其獨特的超微結構表現為(wei) 胞質高電子密度、內(nei) 質網發達，且細胞核形狀多為(wei) 卵圓形或多角形，具有物種及區域間差異。

Müller細胞被認為(wei) 具有潛在的幹細胞特性，在特定條件下能夠去分化為(wei) 其他類型的視網膜神經元，在神經再生和修複研究中備受關(guan) 注。體(ti) 外培養(yang) Müller細胞可為(wei) 研究視網膜發育、功能調控及疾病機製提供實驗模型，同時有助於(yu) 探索視網膜病變的發生機製並開發潛在治療策略。

小鼠視網膜muller細胞特性特征

• Müller細胞呈長梭形，具有較大的細胞核和豐(feng) 富的細胞質，能在視網膜的各層中形成支撐骨架。

• 在超微結構水平上，小鼠視網膜Muller細胞顯示出較高的電子密度和發達的內(nei) 質網，細胞核通常為(wei) 卵圓形或多角形。

• 支持作用：Müller細胞為(wei) 視網膜神經元提供結構支持，並在視網膜中形成支架。
  

• 代謝支持：參與(yu) 調節視網膜神經元的代謝，為(wei) 其提供能量底物（如葡萄糖和乳酸）。

• 離子平衡：Müller細胞通過攝取和回收神經遞質、離子（如鉀）等，維持視網膜內(nei) 環境的穩定。

• 保護作用：在視網膜損傷(shang) 時，Müller細胞能夠響應並參與(yu) 修複過程。

• Müller細胞被認為(wei) 具有幹細胞特性，在特定條件下能夠去分化為(wei) 其他類型的視網膜神經元，參與(yu) 再生和修複。
  

• Müller細胞的鑒定通常依賴於(yu) 其特征性標誌物的表達，如穀氨酰胺合成酶（GS）和GLAST，這些標誌物在免疫熒光染色中表現為(wei) 陽性。
  

• 基因表達：關(guan) 鍵轉錄因子如Pax6和Nestin在Müller細胞的發育和去分化過程中起著重要作用。Pax6被認為(wei) 是視網膜祖細胞的標誌物，而Nestin則是神經元分化早期的標誌物。

• 信號通路：Müller細胞在不同生理和病理狀態下會(hui) 激活不同的信號通路，這些通路涉及到細胞增殖、分化及應對損傷(shang) 等過程

小鼠視網膜muller細胞參數表

原代小鼠視網膜muller細胞培養教程

複蘇小鼠視網膜Müller細胞

• 從(cong) 液氮罐中取出凍存管，迅速置於(yu) 37℃水浴中解凍，輕輕搖晃確保均勻加熱。
  

• 準備預熱至37℃的培養(yang) 基（常用含10%胎牛血清的DMEM培養(yang) 基）。

• 將凍存管內(nei) 1 mL的Müller細胞懸液轉移至含4 mL培養(yang) 基的離心管中，混勻後立即離心。
  

• 在1000 rpm離心3分鍾，棄去上清液後加入1-2 mL新鮮培養(yang) 基，輕輕吹打重懸細胞。
  

• 將重懸的Müller細胞轉移至培養(yang) 瓶中（如T25瓶），加入8 mL培養(yang) 基後放入37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中過夜培養(yang) 。
  

• 次日更換培養(yang) 基，去除可能的殘餘(yu) 凍存液成分，並觀察Müller細胞的貼壁和生長情況。

傳代小鼠視網膜Müller細胞

• 當Müller細胞融合度達到80%-90%時，應及時進行傳(chuan) 代以避免過度擁擠影響細胞狀態。
  

• 棄去培養(yang) 基後，用PBS緩衝(chong) 液洗滌Müller細胞1-2次，以去除培養(yang) 基殘留。
  

• 加入1 mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，輕輕搖勻，確保液體(ti) 均勻覆蓋Müller細胞。
  

• 在37℃培養(yang) 箱中消化約1分鍾，觀察細胞是否開始圓形化且脫離底麵，如完成立即加入培養(yang) 基終止消化。

• 消化液和細胞混合物轉移至離心管中，1000 rpm離心4分鍾後棄去上清。用1-2 mL培養(yang) 基重懸Müller細胞。
  

• 根據需要按1:2或1:3比例分瓶，將細胞懸液均勻分配至新培養(yang) 瓶，並加入適量培養(yang) 基（通常為(wei) 8 mL）。繼續在37℃、5% CO₂條件下培養(yang) 。

凍存小鼠視網膜Müller細胞

• 選擇生長良好的Müller細胞，棄去培養(yang) 基後用PBS洗滌，並加入消化液進行細胞回收。
  

• 用PBS重懸細胞後計數，確保每凍存管內(nei) 的Müller細胞濃度為(wei) 5×10⁶至1×10⁷個(ge) /mL。
  

• 配製凍存液（胎牛血清：DMEM：DMSO按3:1:1混合），輕輕混勻後將1 mL細胞懸液分裝至凍存管中。
  

• 將凍存管放入程序降溫盒，置於(yu) -80℃冰箱中冷凍24小時後轉移至液氮罐中長期保存。
  

• 在凍存前確保Müller細胞狀態良好且無汙染，以保證後續實驗的成功率。