RGC-5小鼠視網膜神經節細胞株

RGC-5小鼠視網膜神經節細胞最初被認為(wei) 來源於(yu) 大鼠，但後續研究表明其實際來源於(yu) 小鼠（PubMed=19443730；PubMed=24664692）。雖然有人認為(wei) RGC-5可能與(yu) 661W細胞相同（PubMed=23975727；PubMed=24021353），但這一觀點受到661W細胞係發起者的部分反對（PubMed=24472671）。

RGC-5細胞株最早是從(cong) 小鼠視網膜神經節細胞中分離並通過永生化技術建立，具有上皮樣細胞形態並呈貼壁生長。盡管最初認為(wei) 其來源於(yu) 視網膜神經節細胞，後續研究發現其缺乏某些視網膜神經節細胞特有的標記物。對RGC-5細胞的線粒體(ti) DNA和Thy-1基因分析表明其DNA序列與(yu) 小鼠相符，而非大鼠，這確認了其小鼠來源。

RGC-5細胞係在傳(chuan) 代過程中可能已完全轉變為(wei) 661W細胞（PubMed=23975727；PubMed=24021353），這一結論基於(yu) 多項檢測，包括免疫印跡和免疫組化實驗，顯示RGC-5細胞與(yu) 661W細胞在多個(ge) 方麵相似，如共同表達SV40病毒的大T抗原。

RGC-5小鼠視網膜神經節細胞株特性

• 可能與(yu) 661W細胞係存在交叉汙染或高度相似

• 含有小鼠的線粒體(ti) DNA和Thy-1基因序列
  

• 表達SV40病毒的大T抗原，這是661W細胞的特征，而非原始RGC-5細胞應有的特征

• 表達特征：缺乏視網膜神經節細胞特有的標記物、可能表達光受體(ti) 細胞的特征，因為(wei) 661W是一種光受體(ti) 細胞係

• 功能特征：對穀氨酸的敏感性發生變化，表現出高生存率（約95%），與(yu) 最初報道的35-50%生存率不符

• 基因特征：DNA分型結果顯示與(yu) 661W細胞高度相似、G-顯帶核型分析結果與(yu) 661W細胞一致

• 其他特征：可能在傳(chuan) 代過程中發生了轉變，從(cong) 早期的視網膜神經節細胞特性轉變為(wei) 更接近661W細胞的特性

RGC-5小鼠視網膜神經節細胞株參數表

RGC-5小鼠視網膜神經節細胞株培養教程

RGC-5細胞複蘇步驟

• 解凍：將凍存的RGC-5細胞從(cong) 液氮中取出，迅速置於(yu) 37°C水浴中解凍，輕輕搖晃至完全融化（約1-2分鍾）。

• 離心：將解凍後的RGC-5細胞懸液轉移到15ml離心管中，加入10ml預溫的完全培養(yang) 基，1000rpm離心5分鍾。

• 重懸：棄去上清，用2ml完全培養(yang) 基重懸RGC-5細胞。

• 接種：將重懸後的RGC-5細胞轉移到預先準備好的培養(yang) 瓶中，加入適量完全培養(yang) 基，輕輕搖勻。

• 培養(yang) ：將培養(yang) 瓶置於(yu) 37°C，5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) RGC-5細胞。

RGC-5細胞傳代步驟

• 觀察：當RGC-5細胞匯合度達到80%-90%時，準備進行傳(chuan) 代。

• 洗滌：棄去舊培養(yang) 基，用PBS緩衝(chong) 液輕輕洗滌RGC-5細胞一次。

• 消化：加入適量0.25%胰酶-EDTA溶液，37°C孵育1-2分鍾，觀察RGC-5細胞開始圓縮、脫落。

• 終止：加入2-3倍體(ti) 積的完全培養(yang) 基終止消化。

• 離心：將RGC-5細胞懸液轉移到離心管中，1000rpm離心5分鍾，棄去上清。

• 重懸：用適量完全培養(yang) 基重懸RGC-5細胞，根據需要進行細胞計數。

• 接種：將RGC-5細胞按適當比例接種到新的培養(yang) 瓶中，加入完全培養(yang) 基，輕輕搖勻。

• 培養(yang) ：將培養(yang) 瓶置於(yu) 37°C，5% CO₂培養(yang) 箱中繼續培養(yang) RGC-5細胞。

RGC-5細胞凍存步驟

• 收集細胞：按照傳(chuan) 代步驟消化並收集RGC-5細胞。

• 離心：1000rpm離心5分鍾，棄去上清。

• 重懸：用凍存液重懸RGC-5細胞，細胞密度調整為(wei) 1×10⁶ cells/ml。

• 分裝：將RGC-5細胞懸液分裝到凍存管中，每管1ml。

• 程序降溫：將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，-1°C/min降溫至-80°C，24小時後轉移至液氮中長期保存RGC-5細胞。

注意事項

• 無菌操作：所有操作應在無菌條件下進行，使用無菌器具和試劑，以確保RGC-5細胞的健康。

• 細胞觀察：定期觀察RGC-5細胞形態和生長狀態，及時更換培養(yang) 基，避免RGC-5細胞過度匯合。

• 細胞狀態：確保RGC-5細胞狀態良好，避免細胞汙染和交叉汙染。